La gélose au fer Kligler est un milieu différentiel pour l'identification des bactéries entériques basé sur la fermentation de la production de dextrose, de lactose et de H2S. Ce milieu permet la différenciation des bacilles Gram-négatifs par leur capacité à fermenter le dextrose ou le lactose, et à produire du sulfure d'hydrogène. La digestion enzymatique de la caséine et la digestion enzymatique des tissus animaux fournissent l'azote, le carbone et les vitamines nécessaires à la croissance de l'organisme. Le citrate d'ammonium ferrique et le thiosulfate de sodium sont des indicateurs de la production de sulfure d'hydrogène. Le rouge de phénol est l'indicateur de pH. Le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique du milieu. L'agar est l'agent solidifiant. La fermentation du dextrose entraîne la production d'acide, qui fait passer l'indicateur du rouge au jaune. Comme il y a peu de sucre, c'est-à-dire de dextrose, la production d'acide est très limitée et donc une réoxydation de l'indicateur est produite à la surface du milieu, et l'indicateur reste rouge. Cependant, lorsque le lactose est fermenté, la grande quantité d'acide produite évite la réoxydation et donc le milieu entier devient jaune.