L'utilisation de tests de prolifération cellulaire et de cytotoxicologie au rouge neutre représente une approche essentielle de la recherche cellulaire, car elle exploite la capacité intrinsèque des cellules à absorber le rouge neutre pour l'évaluation nuancée de la prolifération cellulaire et de la cytotoxicité.

Cette méthodologie repose sur l'interaction dynamique entre les cellules vivantes et le rouge neutre, qui est facilement absorbé et s'accumule dans les lysosomes. Lorsque la prolifération cellulaire s'intensifie, ce qui correspond à une augmentation du nombre de cellules, l'absorption du rouge neutre s'amplifie proportionnellement. À l'inverse, les dommages cellulaires perturbent la capacité des cellules à absorber le rouge neutre, ce qui constitue un indicateur perceptible d'une intégrité cellulaire compromise.

Au-delà de son rôle de marqueur de la santé cellulaire, le rouge neutre sert également d'indicateur de pH polyvalent. Dans des conditions acides, il présente une teinte rouge distinctive, passant au jaune lorsque le pH passe de 6,8 à 8,0. Cet attribut unique permet de visualiser et de quantifier les variations de pH dans les compartiments cellulaires. Notamment, la nature acide du noyau correspond à la coloration jaune observée dans cet organite lorsqu'il est exposé au rouge neutre. En outre, l'environnement lysosomal, caractérisé par son pH acide, se manifeste par une coloration rouge lors de l'interaction avec le rouge neutre.