Réactifs et instruments pour l'immunologie, la biologie cellulaire et la biologie moléculaire.

Tétramères humains - Classe I - FITC

Préparation de réactifs tétramères de classe I du CMH

Les réactifs tétramères de classe I du CMH sont générés principalement par la méthode développée par Altman et al., qui a démontré que les tétramères des complexes CMH de classe I / peptide pouvaient être utilisés comme sondes pour la détection et la quantification des CTL spécifiques de l'antigène (Science 1996, 274: 94 -96)

Une chaîne lourde de CMH de classe I recombinante exprimée par E. coli et une ß2-microglobuline (ß2m) sont repliées en présence d'un antigène peptidique pour générer un complexe monomère / peptide MHC de classe I soluble (monomère). Le monomère est ensuite biotinylé par l'enzyme biotine ligase, BirA, au niveau d'un résidu de lysine présent dans la séquence de biotinylation qui a été ajoutée à l'extrémité C-terminale de la chaîne lourde du CMH de classe I. Le monomère biotinylé est purifié par chromatographie sur colonne. Les monomères biotinylés purifiés sont tétramérisés par mélange avec une streptavidine marquée par fluorescence pour produire des réactifs de tétramère du CMH.

Les tétramères du CMH sont marqués avec des molécules fluorescentes incluant la phycoérythrine (PE), l'allophycocyanine (APC) ou le Brilliant Violet 421 (BV421) et permettent ainsi la détection de cellules T spécifiques de l'antigène par cytométrie de flux ou microscopie à fluorescence.