Colonnes pour la chromatographie d'exclusion de taille (SEC)
La chromatographie d'exclusion de taille sépare les protéines par leur rayon hydrodynamique, une propriété déterminée à la fois par la taille et la forme de la molécule. Contrairement aux autres méthodes chromatographiques, les protéines ne se lient pas à une phase stationnaire en lors de la chromatographie d'exclusion de taille (SEC). Au contraire, les protéines sont séparées par la vitesse à laquelle elles naviguent à travers une phase stationnaire inerte appelée résine d'exclusion de taille.
La SEC est une méthode le plus souvent utilisée dans les étapes finales d'un système de purification en raison de sa capacité à différencier les différentes espèces d'une protéine. Les espèces oligomériques, les protéines dépliées, et les protéines tronquées peuvent toutes être séparées de la protéine native, tout en échangeant simultanément des composants du tampon. Souvent, la chromatographie d'exclusion de taille est utilisée comme une méthode d'échange de tampon plus rapide et plus fiable que la dialyse, car elle est compatible avec plusieurs solvants et nécessite moins de tampon. Un seul solvant est utilisé tout au long de la procédure, et les résines disponibles sont compatibles avec les tampons les plus couramment utilisés.
Le type de résine utilisée et la longueur de la colonne jouent un rôle critique dans la résolution de protéines séparées par SEC. Le choix de la résine dépend de la masse moléculaire des protéines qui nécessitent une séparation et les conditions dans lesquelles la séparation sera effectuée.
