Mix pour sondes pour RT-qPCR

Mix pour sondes pour RT-qPCR


La RT-PCR quantitative en temps réel basée sur des sondes fluorescentes repose sur la détection spécifique d'une séquence d'un produit de PCR souhaité. Contrairement aux méthodes basées sur le SYBR green qui détectent tous les ADN bicaténaires, la RT-PCR quantitative utilisant des sondes utilise une sonde spécifique marquée par fluorescence, ce qui a pour résultat une spécificité et une sensibilité accrues. En outre, une variété de colorants fluorescents sont disponibles de sorte que plusieurs amorces peuvent être utilisées pour amplifier simultanément de nombreuses séquences.

La RT-PCR quantitative utilisant des sondes fluorescentes est donc idéale pour les études à haut débit. Les mixes prêts à l'emploi contiennent tous les composants nécessaires pour la RT-qPCR,  il suffit simplement d'ajouter les sondes de détection fluorescentes, les amorces et l'ARN à amplifier.

De nombreuses sources fluorescentes à base d'amorces et de sondes pour la qPCR ont été conçues, notamment:
  • Sondes d'hydrolyse (TaqMan)
  • Balises moléculaires
  • Sondes d'hybridation double (FRET)
  • Sondes Eclipse
  • Amplifluor assays

Voici comment sélectionner le colorant ROX approprié pour l'appareil qPCR que vous utilisez :

UniverselTous les appareils
Sans ROXBio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon®, Opticon 2, Chromo4;
Cepheid SmartCycler®; Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Illumina Eco qPCR;
Qiagen/Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000;
Roche Applied Science LightCyclerTM 480;
Thermo Scientific PikoReal Cycler.
Low ROXApplied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7; Stratagene MX4000,
MX3005P, MX3000P
High ROXApplied Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast;
StepOne, StepOnePlus