Fragmentierte Antikörper
Sekundäre Antikörper sind Antikörper, die an primäre Antikörper oder Antikörperfragmente binden.
Fragmentierte Sekundärantikörper sind Antikörper, die enzymatisch verdaut wurden, um die Fc-Region des Antikörpers zu entfernen, so dass nur die antigenbindenden Fab- oder F(ab')2-Fragmente übrig bleiben.
Diese Fragmente sind ein- bzw. zweiwertig und können zur Blockierung endogener Immunglobuline auf Zellen, Geweben oder anderen Oberflächen sowie zur Blockierung der exponierten Immunglobuline in Mehrfachmarkierungsexperimenten mit Primärantikörpern derselben Spezies verwendet werden. Sie können auch zur Markierung von Primärantikörpern vor der Inkubation mit der Versuchsprobe verwendet werden. Zu den Vorteilen der Verwendung von Fragment-Sekundärantikörpern gehören die Beseitigung unspezifischer Bindungen zwischen Fc-Anteilen von Antikörpern und Fc-Rezeptoren auf Zellen, die Erleichterung eines besseren Eindringens des Antigens in das Gewebe und die Verringerung des Hintergrunds durch die Bindung von Primärantikörpern bei Doppelfärbeversuchen.
Zu den Vorteilen der Verwendung von sekundären Fab-Fragment-Antikörpern gehören:
- Eliminierung unspezifischer Bindungen zwischen Fc-Anteilen von Antikörpern und Fc-Rezeptoren auf Zellen, was besonders wichtig ist, wenn mit lebenden Zellen gearbeitet wird.
- Erleichterung einer besseren Antigenpenetration in das Gewebe, was für immunhistochemische (IHC) Experimente wichtig ist.
- Verringerung des Hintergrunds durch die Bindung des primären Antikörpers bei Experimenten mit Doppelfärbung.
- Ermöglicht die direkte Konjugation mit nachweisbaren Markern über deren Sulfhydrylgruppen, wodurch sichergestellt wird, dass die aktive Bindungsstelle des Antikörpers nicht beeinträchtigt wird.
