Protein-Elektrophorese
Bei der Proteinelektrophorese handelt es sich um ein Gelelektrophoreseverfahren, das die Analyse einer Mischung von Proteinen ermöglicht. Das verwendete Gel besteht aus Acrylamid, das zu einem Maschennetz polymerisiert. Die Gelelektrophorese ermöglicht die Auftrennung von Proteinen für die Analyse. Sie beruht auf der Fähigkeit geladener Proteine, durch die Maschen eines Gels zu wandern, wenn ein elektrischer Strom angelegt wird. Die Analyse eines Gemischs durch Gelelektrophorese wird an so genannten denaturierten Proteinen durchgeführt, d. h. Proteinen, die ihre Tertiär- und Sekundärstrukturen verloren haben. Ein anionisches Detergens umhüllt die denaturierten Polymerketten und verleiht ihnen eine Ladung (konstantes Ladungs-/Aminosäureverhältnis). Die einzelnen Proteine eines komplexen Gemischs werden so mit einem "Mantel" aus negativen Ladungen überzogen. Wenn eine kontinuierliche Spannung zwischen den Enden eines Gels angelegt wird, an denen das komplexe Gemisch von Proteinen abgelagert wurde, wandern die Proteine durch die Maschen, aus denen das Gel besteht. Die Maschen des Gels halten weniger Moleküle mit geringerem Molekulargewicht zurück, die dann die stärkste Migration aufweisen. Längere Moleküle werden stärker zwischen den Gelmaschen zurückgehalten und weisen eine geringere relative Migration auf. Die Trennschärfe kann durch die Verwendung eines mehr oder weniger grobmaschigen Gels erhöht oder verringert werden. Während der Migration wird ein Molekulargewichtsmarker verwendet, um eine Molekulargewichtsskala zu erhalten, mit der die Größe der einzelnen Proteine in der Mischung bestimmt werden kann.
Um die Proteine nach der Migration sichtbar zu machen, wird meist eine spezifische Färbung verwendet. Die am häufigsten verwendete Färbung ist Coomassie-Blau, es ist aber auch möglich, eine Silberfärbung durchzuführen. Während der Migration wird ein Molekulargewichtsmarker verwendet, um eine Molekulargewichtsskala zu erhalten, anhand derer die Größe der einzelnen Proteine in der Mischung bestimmt werden kann.
