Zytolytische Aktivität ist ein wichtiger Prozess zur Beseitigung intrazellulärer Krankheitserreger und Krebszellen. Dieser Prozess wird durch verschiedene Effektormechanismen des Immunsystems, einschließlich der natürlichen Killerleukozyten (NK), durchgeführt. Die NK-Aktivität wird durch die unspezifische Lyse von mit NK-Rezeptoren infizierten Zielen oder durch den FcγII-Rezeptor (CD16) erleichtert, der an spezifische Antigene gebundenes IgG auf der Oberfläche der Zielzellen erkennt. NK-Zellen können auch die Apoptose der Zielzellen auslösen. Die Aktivität der natürlichen Killerzellen und ihre Wirkung auf die Zielzellen werden häufig in Immunmodulationsexperimenten untersucht.
Durchflusszytometrie-Tests wurden entwickelt, um einige der Schwierigkeiten zu überwinden, die mit älteren Tests wie Laktatdehydrogenase- und 51 Cr-Freisetzungstests verbunden sind.
CFSE, ein grün fluoreszierender Membranfarbstoff, wird verwendet, um der Zielzellenpopulation ein grünes Fluoreszenzmerkmal zu verleihen. Anschließend werden die ungefärbten Effektorzellen hinzugefügt und mit den Zielzellen inkubiert.
Am Ende der Inkubation wird das zweite Reagenz, 7-Aminoactinomycin D (7-AAD), ein roter Fluoreszenzfarbstoff, zugegeben, um alle nekrotischen Zellen durch Bindung an die DNA von Zellen mit Membrandegeneration zu färben.
Da alle Zielzellen anfänglich mit grün fluoreszierendem CFSE markiert sind und die Effektorzellen nicht, lassen sich diese beiden Populationen leicht unterscheiden. Kontrollpopulationen werden zur Kompensation des Durchflusszytometers verwendet. Bei richtiger Synchronisierung des Durchflusszytometers lassen sich lebende und nekrotische Zellen in einem einzigen Probenröhrchen leicht unterscheiden.