Reagenzien und Instrumente für die Immunologie Zellbiologie und Molekularbiologie

NeoPrep mini

Beschreibung

Neo Biotechs miniprep kits (NB-60-0001) bieten eine schnelle und effiziente Möglichkeit, reine Plasmid-DNA aus Escherichia coli zu extrahieren.
Das Verfahren umfasst die alkalische Lyse von Bakterienzellen und die DNA-Bindung an Siliziumdioxid unter Hochsalzbedingungen.
Die resultierende DNA ist ideal für die PCR, die automatisierte fluoreszierende Sequenzierung und verschiedene enzymatische Anwendungen.

Lagerungsbedingungen und Vorbereitung der Reagenzien

Alle Kitkomponenten können bei Raumtemperatur (20-25 °C) gelagert werden und sind bis zum Verfallsdatum haltbar. Vor Gebrauch 1 mL Puffer A1 in das RNase A-Fläschchen geben und vortexen. Die resultierende Lösung in die Flasche mit Puffer A1 überführen und gründlich mischen. Puffer A1 mit RNase sollte bei häufigem Gebrauch bei 4 °C und bei seltenem Gebrauch bei -20 °C gelagert werden. Fügen Sie jeder Flasche Puffer A4 32 ml 100%iges molekularbiologisches Ethanol zu. Puffer A2 kann bei der Lagerung einen Niederschlag bilden. Falls erforderlich, lösen Sie den Niederschlag durch Erwärmen der Lösung auf 37 °C auf. Die Puffer A3 und AY enthalten Guanidinhydrochlorid. Tragen Sie bei der Verwendung dieses Kits Handschuhe und eine Schutzbrille.

Systemkomponenten

• Puffer A1 - 15 mL

• Puffer A2 - 15 mL

• Puffer A3 - 20 mL

• Puffer AY - 30 mL

• Puffer A4 (Konzentrat) - 8 mL

• Puffer AE (enthält kein EDTA) - 15 mL

• RNase A - 5 mg

• Neo Biotech Spin-Säulen - 50

• Entnahmeröhrchen (2 mL) - 50

Züchtung von Bakterienkulturen:

LB-Medium wird für die Kultivierung von Bakterienzellen empfohlen, es können aber auch reichhaltige Medien wie 2xYT oder TB verwendet werden.
Reichhaltige Medien fördern im Vergleich zu LB ein schnelleres Wachstum und einen früheren Eintritt in die stationäre Phase.
Die Verwendung reichhaltiger Medien kann jedoch zu mehr toten oder hungernden Zellen führen, was zu teilweise abgebauter Plasmid-DNA und einer möglichen Kontamination mit chromosomaler DNA führt.
Überwucherte Kulturen können übermäßiges bakterielles Material enthalten, was die Lyse- und Präzipitationsschritte beeinträchtigt.
Zu Beginn wählen Sie eine einzelne Kolonie von einer Selektivplatte aus und beimpfen 1-5 ml LB-Medium mit dem entsprechenden Antibiotikum.
12-16 Stunden bei 37°C unter kräftigem Schütteln bebrüten.