Kundenspezifische Dienstleistung : Herstellung von Maus-Monoklonalen nach genetischer Immunisierung
Diese Technik ermöglicht es, die Maus dazu zu bringen, in vivo das Gen zu exprimieren, das für das gewünschte Antigen kodiert.
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Das genhaltige Plasmid wird direkt in Mäuse injiziert, die dann das gewünschte Antigen in vivo exprimieren werden. Le plasmide contenant le gène d'intérêt est directement injecté chez l'animal qui va ensuite exprimer la protéine in vivo.
Unter den transfizierten Zellen werden die Antigen-präsentierenden Zellen (APC) die gezielten Moleküle über MHC an die Akteure der Immunantwort weitergeben.
Ein Teil dieser Akteure, die B-Zellen, werden spezifische Antikörper produzieren.
Standard-Protokoll :
- Konstruktion des DNA-Expressionsvektor-Plasmids mit einem CMV-Promotor und Enhancern, die den Antigen-ORF enthalten
- Transfektion von HEK293-Zellen mit Plasmid-DNA und Herstellung eines Antigenextrakts
- 3-malige Injektion der Plasmid-DNA in Mäuse
- Entlüften der Mäuse
- Test der Seren auf antigenspezifische Titer unter Verwendung des Proteinextrakts (in HEK293) als Beschichtungsantigen
- Wenn Titer nicht zufriedenstellend, 1 oder 2 weitere Auffrischungen
- Wenn der Titer zufriedenstellend ist, werden die restlichen Schritte der Hybridom-Entwicklung durchgeführt.
Wichtige Zahlen :
- Minimale Anzahl von Mäusen : ...4.....
- Protokolldauer: 100-140........ Tage
- Anzahl der Injektionen pro Tier : 3-5.....
- Menge des Antigens pro Injektion : ...20.... µg/Maus
- Anzahl der Probenentnahmen pro Tier : 1 - 2.....
Verwandte Dienste verfügbar:
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