Kundenspezifische Dienstleistung: Herstellung monoklonaler Antikörperbibliotheken

Dabei werden sowohl lineare Peptide als auch Strukturepitope auf der Proteinoberfläche ins Visier genommen.

Eine typische SEAL™-Bibliothek

• besteht aus 6-12 monoklonalen Antikörpern mit hoher Affinität
• zielt spezifisch auf 4-8 unabhängige Proteinoberflächenepitope ab.
• Dies erhöht die Chance auf die Entdeckung erfolgreicher Antikörper im Vergleich zu herkömmlichen Methoden, bei denen Antikörper nur auf 1-3 Epitope gegen kurze Peptide oder lösliche Proteinantigene abzielen.

Basierend auf Anwendungsergebnissen von >100 SEAL™-Bibliotheken, die für Membranproteine, lösliche Faktoren, Transkriptionsfaktoren und Kinasen generiert wurden, werden mit SEAL™-Antikörpern im Durchschnitt mindestens 2-mal mehr erfolgreiche Antikörper für Western- und IP-Experimente entdeckt als mit Antikörpern, die mit herkömmlichen Methoden generiert wurden. Bei schwierigen Zielmolekülen wie Membranrezeptoren und Transkriptionsfaktoren ist die Wahrscheinlichkeit, dass SEAL™-Antikörper erfolgreich sind, 3-4 Mal höher. Antikörper um ein Vielfaches größer ist, und bei Proteinen mit geringer Abundanz scheint dies ein noch entscheidenderer Faktor für die Generierung erfolgreicher Antikörper zu sein. Antikörperbibliothek hat gegenüber der herkömmlichen monoklonalen und polyklonalen Antikörperherstellung erhebliche Vorteile in Bezug auf Zeit, Kosten und vor allem die Qualität der Antikörper.
 

SEAL™-Bibliothekserstellung

Ein proprietäres Berechnungsmodell wird verwendet, um zehn Residue lange Abschnitte zu identifizieren, die auf der Proteinoberfläche exponiert sind (SEAL™-Antigene). Durch die Kombination von Sekundärstrukturvorhersage, phylogenetischer Analyse und Strukturmodellierung erreicht diese Methode eine Genauigkeit von 73 % (67 % Empfindlichkeit und 82 % Spezifität) bei der Identifizierung exponierter linearer Peptidepitope (SEAL™-Epitope).



Synthetische Gene, die für mehrere SEAL?-Epitope kodieren, werden in einen firmeneigenen DNA-Vektor eingefügt, der aus Immunogenitätsverstärkungsfaktoren (IEF, z. B. mehrere T-Epitope) und DNA-Sequenzen besteht, die zu partikulären, hoch immunogenen rekombinanten Proteinen führen, die bei der Expression in E. Coli die Oberfläche des Zielproteins abtasten.



Strukturelle Domänen werden als lösliche Proteine in E. Coli oder Säugetierzellen parallel zu linearen SEAL™-Epitopen hergestellt. Ein proprietäres bakterielles Expressions-/Sekretionssystem wird verwendet, um lösliche Proteine im Kulturmedium zu produzieren.
Mäuse, die mit strukturellen Immunogenen immunisiert werden, produzieren Antikörper, die einige wenige dominante Konformationsepitope der Zielproteine erkennen können. Diese Art von Antikörpern ist oft erfolgreicher für Anwendungen wie IP, Durchflusszytometrie oder Funktionsstudien.



Mäuse, die mit IEF-SEAL™-Epitop-Antigenen unter Verwendung einer proprietären, optimierten Immunisierung mit nur einer geringen Menge an Antigenen immunisiert werden, erzeugen innerhalb von drei Wochen hochaffine IgG-Immunantworten. Milzzellen der geopferten Mäuse werden mit SP2/0-Zellen fusioniert und mit quantitativem kompetitivem ELISA gescreent, um Hybridomzelllinien auszuwählen, die Antikörper sezernieren, die Epitopsequenzen mit mindestens nanomolarer Affinität spezifisch erkennen. Ausgewählte Hybridome werden dann mehreren Runden der Subklonierung unterzogen, um stabile Zelllinien zu etablieren.


SEAL™ monoklonale Antikörperbibliotheken wurden entwickelt, um die Erfolgsrate bei der Entwicklung von funktionierenden Antikörpern für verschiedene Anwendungen zu maximieren. Um dies zu erreichen, werden 4 Standardtypen von SEAL-Bibliotheken angeboten. Diese Produkte unterscheiden sich in :

• die Anzahl und Art (Peptide oder Proteine) der für die Immunisierung verwendeten Antigene
• die Anzahl der anvisierten Epitope
• die Anzahl der an die Kunden gelieferten Antikörper

Der Produktvergleich und einige nützliche Auswahlregeln sind unten aufgeführt: