Protocol revelation amplified : DBS Range

I. Erforderliches Material

Reagenzien
- Primärer Antikörper
- Primärer Antikörper Verdünnungsmittel
- Pre-Blocking-Lösung
- Befestigungsmittel

Puffer
- Immuno-Waschpuffer
- Xylol oder Entparaffinierungsreagenzien
- Absolutes Ethanol
- Destilliertes oder deionisiertes Wasser



II. Dauer des Versuchs
- 10 mn Sperrung
- 30-60 Minuten Inkubation der Schnitte mit dem Primärantikörper
- 36 bzw. 31 Mio. andere Inkubationszeit
- 20 mn Spülvorgänge
-TOTAL : 1h31 bis 2h06


III. Färbeverfahren

1. Peroxidase-Block. Objektträger 5 Minuten lang im Peroxidase-Block inkubieren.
Die Objektträger 3 x 1 Minute mit Immuno-Waschpuffer spülen.
2. Vor-Blockierung (optional). 2 Tropfen (100 µl) oder so viel Vorblockierlösung hinzufügen, dass der Gewebeschnitt bedeckt ist (10 Minuten).
Lösung abtropfen lassen oder abtupfen. Nicht ausspülen.
3. Primärer Antikörper. 30 bis 60 Minuten mit dem Primärantikörper inkubieren, der nach dem vom Hersteller empfohlenen Protokoll in der gewünschten Konzentration hergestellt wurde. Konzentrierte Primärantikörper können mit Primärantikörper-Verdünnungsmittel verdünnt werden.
Objektträger 3 x 1 Minute in Immuno-Waschpuffer waschen.
4. Polymer Penetrationsverstärker. Den Polymer Penetration Enhancer auftragen und 10 Minuten lang inkubieren.
Die Objektträger 3 x 1 Minute mit Immuno-Waschpuffer spülen.
5. PolyVue-Etikett. Inkubieren Sie das Gewebe 10 Minuten lang mit PolyVue HRP Label-Reagenz
Objektträger 3 x 1 Minute mit Immuno Wash Buffer waschen
6. Stabiles DAB/Plus Bereiten Sie die Arbeitslösung des stabilen DAB/Plus-Substrats vor (siehe oben).
Das Gewebe 5-10 Minuten lang mit der vorbereiteten stabilen DAB/Plus-Substratlösung inkubieren. Den Grad der Färbung überwachen, um die optimale Inkubationszeit zu bestimmen. Objektträger 3 x 1 Minute mit Wasser abspülen.
7. Gegenfärbung. Das Gewebe 1 Minute lang mit einer Gegenfärbung (z. B. Hämatoxylin) inkubieren.
Objektträger 3 x 1 Minute in Wasser waschen, anschließend 1 x 1 Minute in Immuno-Waschpuffer, dann 1 x 1 Minute in Wasser.
8. Dehydrieren&Deckblatt. Dehydratisieren Sie die Gewebe durch abgestufte Ethanolreihen, gefolgt von Xylolreihen.
Deckgläser mit einem permanenten Einbettungsmittel bestreichen.


IV. Suchmaschine
- Primärer Antikörper