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NeoTaqII-DNA-Polymerase

 Beschreibung

  • Die neue Generation von DNA-Polymerasen auf Taq-Basis  NB-60-0005 optimiert für Standard-PCR-Anwendungen.
  • Entwickelt, um hohe DNA-Ausbeuten bei kürzeren PCR-Laufzeiten (15-30 s/kb Verlängerung) zu erzielen.
  • Fehlt die 3'→5'-Exonukleaseaktivität und unterstützt die zuverlässige Amplifikation eines breiten Spektrums von DNA-Vorlagen bis zu 6 kb.
  • Geeignet für PCR unter minimal optimierten Bedingungen.
                  

 

 

Lagerungsbedingungen

  • Alle Komponenten sollten bei -20°C in einem Gefrierschrank ohne Abtauzyklen gelagert werden, um eine maximale Haltbarkeit zu gewährleisten.
  • Das Enzym bleibt bei 4°C oder Raumtemperatur bis zu 3 Tage lang stabil, ohne seine Stabilität zu beeinträchtigen.
  • Das Produkt bleibt bis zum Verfallsdatum stabil, wenn es wie angegeben gelagert wird.

 

Definition der Einheit

  • Eine Einheit des Enzyms ist definiert als die Menge, die erforderlich ist, um den Einbau von 10 nmol dNTPs in säureunlösliches Material in 30 Minuten bei 72 °C unter kontrollierten Versuchsbedingungen zu katalysieren.

 

Enzym-Konzentration

  • Die Enzymkonzentration beträgt 5 U/μL, aufgelöst in Glycerin.

 

Magnesiumchlorid-Lösung

  • Eine mitgelieferte 50 mM MgCl2-Lösung ermöglicht es dem Benutzer, die Mg2+-Konzentration in PCR-Setups zu optimieren.
  • Eine Konzentration von 2,5 mM MgCl2 ist im Allgemeinen mit der Neo Biotech Taq II DNA-Polymerase wirksam.
  • Schütteln Sie die MgCl2-Lösung nach dem Auftauen gründlich.

 

Primer-Design

  • Die PCR-Primer sollten zwischen 15 und 30 Basen umfassen und die betreffende Region flankieren.
  • Die Primer sollten einen GC-Gehalt von 40-60 % aufweisen und Sequenzen vermeiden, die eine interne Sekundärstruktur erzeugen könnten.
  • Die 3'-Enden der Primer sollten nicht komplementär sein, um die Bildung von Primer-Dimeren zu vermeiden.
  • Vermeiden Sie drei aufeinanderfolgende G- oder C-Nukleotide in der Nähe des 3'-Endes, um ein unspezifisches Primer-Annealing zu verhindern.
  • Idealerweise sollten beide Primer für ein effizientes Annealing nahezu identische Schmelztemperaturen (Tm) aufweisen.

 

DNA-Vorlage

  • Die empfohlene Menge an genomischer DNA-Matrize beträgt 10 ng bis 500 ng, es können aber auch nur 5 pg verwendet werden.
  • Für die Amplifikation von weniger komplexer DNA (1-20 ng) können geringere Mengen ausreichen.
  • Bei Verwendung der cDNA-Synthese als Matrize sollten Sie nicht mehr als 10 % des endgültigen PCR-Reaktionsvolumens verwenden.

 

Qualitätskontrolle Assays

  • Die Taq II DNA-Polymerase wird auf ihre Reinheit geprüft, wobei eine Reinheit von >90% durch SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese und Coomassie-Blau-Färbung bestimmt wird.
  • Die Kontamination mit genomischer DNA wird durch PCR bewertet und darf nicht nachweisbar sein.

 

Nuklease-Assays

  • Nuklease-Assays werden mit pNZY28 Plasmid-DNA und Neo Biotech Taq II DNA-Polymerase durchgeführt, gefolgt von der Visualisierung auf einem mit GreenSafe Premium gefärbten Agarosegel.
  • Es sollten keine sichtbaren Kerben oder Schnitte in der Nukleinsäure zu sehen sein. Ähnliche Tests werden mit dem Reaktionspuffer und der MgCl2-Lösung durchgeführt.

Funktioneller Assay

  • Die Taq II DNA-Polymerase wurde ausgiebig auf ihre Leistung bei der PCR-Amplifikation von DNA-Fragmenten unterschiedlicher Größe aus menschlicher genomischer DNA getestet.
  • Die resultierenden PCR-Produkte sollten als einzelne Banden auf einer gefärbten Agarose erscheinen.