Farbstoffe für die Superauflösungsmikroskopie
CF®-Farbstoffe für mehrfarbige Superauflösungsmikroskopie
Jüngste Veröffentlichungen, in denen synthetische Farbstoffe für die superauflösende Bildgebung verglichen wurden, haben gezeigt, dass CF®-Farbstoffe bei mehreren Methoden die beste Leistung erbringen. Die überragende Helligkeit, Photostabilität und die photochemischen Schalteigenschaften bestimmter CF®-Farbstoffe sind ideal für 3-D-SIM, 3-D-STORM und andere Superresolution-Techniken.
Der CF®405M von Biotium hat sich als der hellste und photostabilste kurzwellige Fluoreszenzfarbstoff für SIM erwiesen. Mehrere CF®-Farbstoffe aus dem sichtbaren roten, fernroten und nahen infraroten Spektrum wurden für STORM validiert, darunter die Dreifarbbildgebung mit CF®568, CF®647 und CF®680. Siehe Lehmann et al. 2015 und eine vollständige Liste der Referenzen auf der nächsten Seite. Biotium bietet eine große Auswahl an mit CF®-Farbstoffen markierten Antikörpern an, darunter Single-Label-Sekundärfarbstoffe mit geringem Markierungsgrad, die Berichten zufolge optimal für STORM1 sind. Wir bieten auch andere Konjugate, Reaktivfarbstoffe und Markierungskits an.
Abbildung 1. CF®568 (links) erzeugt bessere Bilder als Cy®3b (rechts) in der 3-D-STORM-Mikroskopie.
Fixierte Zellen wurden mit einem Maus-Anti-Tubulin-Antikörper gefärbt, gefolgt von Farbstoff-konjugierten Antimaus-Sekundärantikörpern. Siehe Legende zu Abbildung 2 für die Bildgebungsbedingungen. Die Farbstoffmoleküle wurden mit einem 560-nm-Laser photoswitched und abgebildet; ein 405-nm-Laser wurde verwendet, um die Reaktivierung des Farbstoffs in den emittierenden Zustand zu unterstützen.
Abbildung 2. Vergleich der herkömmlichen Weitfeldmikroskopie (links) mit STORM (rechts) unter Verwendung von CF®-Farbstoffkonjugaten.
Fixierte Zellen wurden mit einem Maus-Anti-Tubulin-Antikörper gefärbt, gefolgt von einem mit CF®-Farbstoff konjugierten Anti-Maus-Sekundärantikörper (obere Reihe: CF®647, mittlere Reihe: CF®660C, untere Reihe: CF®680). Für STORM wurden die Proben in Puffer versiegelt, der 5 % (w/v) Glukose, 100 mM Cysteamin, 0,8 mg/mL Glukoseoxidase und 40 μg/mL Katalase in Tris-HCl (pH 7,5) enthielt. Die Proben wurden mit einem Nikon Ti-Eclipse w/ PFS Mikroskop mit einem CFI Plan Apo Lambda 100x Ölobjektiv abgebildet. Die Farbstoffmoleküle wurden mit einem 647-nm-Laser photoswitched und abgebildet; ein 405-nm-Laser wurde verwendet, um die Reaktivierung des Farbstoffs in den emittierenden Zustand zu unterstützen. Die Emission wurde mit einer Andor iXon Ultra 897 EMCCD-Kamera mit insgesamt 100.000 Bildern pro Bild und einer Bildfrequenz von 110 Hz aufgenommen.
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