Kit zur Bestimmung des Zellwachstums
MTT-Assay auf Basis der mitochondrialen Aktivität
Es hat sich gezeigt, dass die Zellproliferation bei der Entwicklung und der Bildung von Mustern zahlreiche Funktionen hat, darunter auch die Rolle des Wachstums, der Morphogenese und der Genexpression.
Zu diesem Zweck werden üblicherweise die Hämozytometerzählung, die Bestimmung des Proteingehalts, die Messung des Feucht- oder Trockengewichts und die Bestimmung der optischen Dichte (OD) verwendet. Während die Hämozytometerzählung und die Bestimmung des Proteingehalts den Nachteil haben, dass sie zeitaufwändig und mühsam sind, ist die Messung des Feucht- oder sogar Trockengewichts bei sehr kleinen Kulturvolumina nicht praktikabel.
Eine alternative Methode basiert auf der Umwandlung und kolorimetrischen Quantifizierung von MTT [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid]: Die Atmungskette und andere Elektronentransportsysteme reduzieren MTT und andere Tetrazoliumsalze und bilden dabei in der Zelle nicht wasserlösliche violette Formazankristalle. Die Menge dieser Kristalle kann spektrophotometrisch bestimmt werden und dient als Schätzwert für die Anzahl der Mitochondrien und damit für die Anzahl der lebenden Zellen in der Probe. Diese Eigenschaften können in Zytotoxizitäts- oder Zellproliferationstests genutzt werden, die in der Immunologie, Toxikologie und Zellbiologie weit verbreitet sind.
Grundsatz :
Das Prinzip des MTT-Tests beruht auf der mitochondrialen Aktivität. Bei lebensfähigen Zellen ist die mitochondriale Aktivität konstant, so dass eine Zunahme oder Abnahme der Zahl der lebensfähigen Zellen linear mit der mitochondrialen Aktivität zusammenhängt. Die mitochondriale Aktivität der Zellen spiegelt sich in der Umwandlung des Tetrazoliumsalzes MTT in Formazankristalle wider, die für eine homogene Messung in Lösung gebracht werden können. So kann jede Zunahme oder Abnahme der Anzahl lebensfähiger Zellen durch spektrophotometrische Messung der Formazankonzentration mit einem Plattenlesegerät bei 570 nm bzw. 690 nm festgestellt werden.
Bestandteile des Bausatzes : MTT-Lösung + MTT-Lösungsmittel
