NeoStress

Der antioxidative Neostress-Live-Zell-Assay wurde auf der Grundlage der Light Up Cell System-Technologie entwickelt, die eine genaue Überwachung der intrazellulären ROS-Produktion ermöglicht. Die Technologie wurde für einen hohen Durchsatz auf 96- und 384-Well-Platten optimiert, die für handelsübliche Fluoreszenz-Lesegeräte geeignet sind. Das einfache Protokoll beschränkt sich auf die Zugabe der Lösung A1 in das Kulturmedium und zwanzig Beleuchtungs-/Fluoreszenz-Messreihen.

Mechanismus

Neostress basiert auf der Aktivierung eines intrazellulären Photosensibilisators in einem Protokoll, das nur eine Abfolge von Lichtblitzen und Fluoreszenzmessungen erfordert. Das Verfahren wird als Light-up Cell System bezeichnet, weil die Fluoreszenz des Biosensors während seiner Photoinduktion durch Beleuchtung ansteigt. Der Biosensor dringt passiv in die Zellen ein, wird aber durch Efflux-Transportproteine schnell aus den funktionierenden Zellen entfernt, was zu einem geringen Fluoreszenzsignal führt. Bei Lichteinfall werden durch die Photoinduktion des Biosensors intrazelluläre ROS erzeugt, die die Zellhomöostase oder die Fähigkeit der Zelle, den Biosensor freizusetzen, verändern und seinen massiven Eintritt in die Zellen auslösen, was zu einem erhöhten Fluoreszenzsignal führt. Der Anstieg der Fluoreszenz wird verzögert oder aufgehoben, wenn die Zellen zuvor mit einer antioxidativen Substanz bebrütet wurden, die die von den Zellen unter Beleuchtung produzierten freien Radikale neutralisiert.

Merkmale:

• Für 400 Messpunkte in 96-Well-Platten
• Ein-Schritt-Verfahren
• Keine Waschungen
• Lagerung bei 4°C
• Zeit bis zum Verfall: 6 Monate nach Erhalt
• Standardverfahren für die meisten Primärzellen, hiPSCs, immortalisierte Zelllinien,... (Optimierungskit bei Bedarf erhältlich)
• Kann für Multiplexing verwendet werden

Allgemeines Assay-Protokoll

1. Proben 10-fach konzentriert vorbereiten
2. Für die Positivkontrolle 63μl Kulturmedium ohne Serum in das Röhrchen mit Lösung B geben. Mit der Pipette mischen
3. Kulturmedium von den Zellen entfernen, dann 90 μl Kulturmedium ohne Serum hinzufügen
4. 10 μl der Positivkontrolle und der Probenbedingungen in die Vertiefungen geben
5. 1 Stunde lang im Inkubator bebrüten
6. Für 96 Vertiefungen 3,13 μl der Lösung A1 + 2596,9 μl des Kulturmediums ohne Serum vorbereiten. Mit der Pipette mischen
7. 25 μl dieser verdünnten Lösung A1 pro Vertiefung zugeben. Während dieses und der nächsten Schritte übermäßige Lichteinwirkung vermeiden.
8. Die Platte zum festgelegten Zeitpunkt während des Optimierungsprotokolls bei Raumtemperatur inkubieren.
9. Die Fluoreszenz (Fpre) bei den folgenden Wellenlängen messen:
10. λAnregung= 505nm (±10nm)
11. λEmission= 535nm (±10nm)
12. Beleuchten Sie die Platte mit der AOP-Beleuchtung (AOPLight B1 oder AOPLight HTS)
13. Fluoreszenz messen (Fpost)
14. Die Schritte 10 und 11 zwanzigmal wiederholen

N.B.: Unspezifische Fluoreszenz kann durch Ablesen der Fluoreszenz vor Schritt 6 gemessen werden.

Sicherheit

Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke und nicht für den menschlichen oder therapeutischen Gebrauch bestimmt. Potenziell schädlich. Längere oder wiederholte Exposition vermeiden. Nicht in die Augen, auf die Haut oder auf die Kleidung gelangen lassen. Nach der Handhabung gründlich waschen. Bei Augen- oder Hautkontakt die betroffenen Stellen 15 Minuten lang mit reichlich Wasser waschen und einen Arzt aufsuchen. Bei Einatmen oder Verschlucken die Person an die frische Luft bringen und sofort einen Arzt aufsuchen.

Liste der Produkte