Ensayos basados en reporteros
Los ensayos basados en reporteros son ensayos biológicos utilizados para medir la capacidad reguladora de una secuencia de ADN desconocida, estudiar la regulación génica por factores de acción cis o trans, o medir la activación de vías de señalización celular.
En estos ensayos, la secuencia promotora desconocida se vincula a un gen reportero fácilmente detectable cuyo producto puede detectarse fácilmente y medirse de forma cuantificable. Los niveles de expresión del gen reportero se monitorizan cuantificando la actividad enzimática de la proteína reportera, que se utiliza para caracterizar secuencias reguladoras, actividad de factores de transcripción, señalización celular o vías de señalización.
Los genes informadores más comunes son la beta-galactosidasa, la luciferasa, la beta-lactamasa, la fosfatasa alcalina y la GFP (proteína verde fluorescente).
Las luciferasas se utilizan para crear ensayos reporteros bioluminiscentes que son altamente cuantitativos, sensibles en un amplio rango dinámico y fácilmente detectables mediante la medición de la salida de luz.
La mayoría de los ensayos con genes informadores incluyen uno o dos genes informadores, con el segundo informador expresado a partir de un vector "control" para normalizar los resultados del informador experimental.
El gen informador de control suele estar dirigido por un promotor constitutivo, y el vector de control se cotransfecta con el informador experimental.
Las células se exponen a diferentes factores o condiciones, cuyo efecto puede seguirse fácilmente midiendo los cambios en la emisión de luz. Para medir la expresión de la proteína del gen informador se utilizan diversos métodos de detección, como la luminiscencia, la absorbancia y la fluorescencia.
Los ensayos reporteros también pueden utilizarse para evaluar cuantitativamente la actividad del ARNi e identificar moduladores del ARNi. También pueden emplearse para analizar sustancias químicas que alteran la señalización androgénica.
Las células reporteras utilizan la transfección transitoria para garantizar resultados fiables y precisos, y las células están optimizadas para proporcionar las mejores condiciones experimentales con los reactivos suministrados en los kits, lo que permite estandarizar fácilmente los experimentos.
Los kits de ensayo basados en células reporteras ofrecen una sensibilidad de ensayo y un rango dinámico óptimos a la hora de cuantificar la actividad del receptor, lo que los convierte en un servicio de cribado fiable y rentable para compuestos farmacéuticos, sustancias químicas o muestras medioambientales.
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