Protocol for flow cytometry on tissues

Productos de matriz de ADN

I. Materiales requeridos

Tampones

- Solución de Prehibridación: 5xSSC, 0,1%SDS, 0,1%BSA
- Solución de hibridación 2x: Formamida al 40-70 %, SSC x 10,  SDS al 0,02%, ADN de esperma de salmón al 0,02%  (opcional)
- Solución de lavado 1: 2xSSC, SDS al 0,1%
- Solución de lavado 2: 0,1xSSC, SDS0,1%
- Solución de lavado 3: 0,1xSSC

Material

- Cajas para prehibridación e hibridación
- Cámara de hibridación
- Micropipetas monocanal de 20 µl a 1.000 µl con puntas desechables
- Pipetas graduadas de 5 ml y 10 ml
- Baño maría

II. Duración del experimento

- 30 min de prehibridación
- 12 a 16 horas de hibridación
- 10 min de lavados
- TOTAL: de 13 a 17 horas

III.Procedimiento de funcionamiento

Prehibridación
1. Prepare un volumen apropiado de Solución de prehibridación.
Nota: El volumen requerido depende de la caja utilizada, el nivel debe alcanzar el código de barras de la cuchilla.
2. Precalentar la solución a 55 ° C.
3. Poner los portaobjetos en la solución e incubar durante 30 min con agitación.
4. Enjuague 5 veces con H2O

Hibridación estándar
1. Preparar la Solución de Hibridación 2x
2. Mezclar la muestra marcada con la solución de hibridación 2x
3. Ajuste el volumen para llegar a una concentración de 1x y mezcle
4. Incubar durante 2 min a 95 ° C
5. Coloque el portaobjetos y colóquelo en la cámara de hibridación
6. Incubar durante 12 a 16 horas a 42 ° C

Hibridación de Lavado
1. Preparar las soluciones de lavado 1, 2 y 3.
2. Retirar el portaobjetos de la cámara de hibridación y ponerlo en la solución de lavado 1
3. Incubar con agitación durante 5 min
4. Transferir a la solución 2 e incubar, agitando durante 5 min
5. Transferir al primer volumen de solución 3 e incubar, agitando durante 1 min
6. Repita el paso 5.