Kit de determinación del crecimiento celular
Ensayo MTT basado en la actividad mitocondrial
Se ha demostrado que la proliferación celular desempeña múltiples funciones en el desarrollo y la formación de patrones, como el crecimiento, la morfogénesis y la expresión génica.
Los métodos utilizados habitualmente para este fin son el recuento hemocitométrico, la determinación del contenido de proteínas, la medición del peso húmedo o seco y la determinación de la densidad óptica (DO). Mientras que el recuento hemocitométrico y la determinación de proteínas tienen la desventaja de requerir mucho tiempo y ser tediosos, la medición del peso húmedo o incluso seco no es práctica para volúmenes de cultivo muy pequeños.
Un método alternativo se basa en la transformación y cuantificación colorimétrica del MTT [bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio]. La cadena respiratoria y otros sistemas de transporte de electrones reducen el MTT y otras sales de tetrazolio y forman así cristales de formazán violeta no solubles en agua dentro de la célula. La cantidad de estos cristales puede determinarse espectrofotométricamente y sirve como estimación del número de mitocondrias y, por tanto, del número de células vivas en la muestra. Estas características pueden aprovecharse en ensayos de citotoxicidad o proliferación celular, muy utilizados en inmunología, toxicología y biología celular.
Principio :
El principio del ensayo MTT se basa en la actividad mitocondrial. Para las células viables, la actividad mitocondrial es constante y, por tanto, un aumento o disminución del número de células viables está linealmente relacionado con la actividad mitocondrial. La actividad mitocondrial de las células se refleja en la conversión de la sal de tetrazolio MTT en cristales de formazán, que pueden solubilizarse para una medición homogénea. Así, cualquier aumento o disminución del número de células viables puede detectarse midiendo la concentración de formazán espectrofotométricamente mediante un lector de placas a 570 nm frente a 690 nm.
Componentes del kit : Solución MTT + disolvente MTT
