Servicio a medida: Producción de bibliotecas de anticuerpos monoclonales
Tecnología SEAL de biblioteca de anticuerpos de epítopos de superficie para generar una biblioteca de anticuerpos monoclonales de alta afinidad contra una biblioteca de antígenos representativos de una superficie proteica.
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El objetivo son tanto los péptidos lineales como los epítopos estructurales de la superficie de la proteína.
Una biblioteca SEAL™ típica
- consiste en 6-12 anticuerpos monoclonales de alta afinidad
- se dirige específicamente a 4-8 epítopos independientes de la superficie de la proteína.
- Esto aumenta enormemente las posibilidades de descubrir anticuerpos exitosos en comparación con los métodos tradicionales en los que los anticuerpos sólo se dirigen a 1-3 epítopos contra péptidos cortos o antígenos proteicos solubles.
Según los resultados de aplicación de >100 bibliotecas SEAL™ generadas para proteínas de membrana, factores solubles, factores de transcripción y quinasas, en promedio, se descubren al menos 2 veces más anticuerpos exitosos para experimentos Western e IP a partir de anticuerpos SEAL™ que a partir de anticuerpos generados por métodos convencionales. Para dianas difíciles como receptores de membrana y factores de transcripción, los anticuerpos SEAL™ tienen 3-4 veces más probabilidades de éxito. Esto no es sorprendente, ya que el número de anticuerpos independientes y epítopos diana es varias veces mayor en los anticuerpos SEAL? y para proteínas de baja abundancia, esto parece ser un factor aún más crítico para generar anticuerpos exitosos. La generación de bibliotecas de anticuerpos SEAL? presenta ventajas significativas sobre la generación tradicional de anticuerpos monoclonales y policlonales en cuanto a tiempo, coste y, lo que es más importante, calidad de los anticuerpos.
Generación de bibliotecas SEAL™
Se utiliza un modelo computacional propio para identificar tramos de diez residuos expuestos en la superficie de la proteína (antígenos SEAL™). Al combinar la predicción de la estructura secundaria, el análisis filogenético y el modelado estructural, este método alcanza una precisión del 73% (67% de sensibilidad y 82% de especificidad) en la identificación de epítopos peptídicos lineales expuestos (epítopos SEAL™).
Los genes sintéticos que codifican múltiples epítopos SEAL? se insertan en un vector de ADN patentado compuesto por Factores de Potenciación de la Inmunogenicidad (IEF, por sus siglas en inglés, por ejemplo, múltiples epítopos T) y secuencias de ADN que darán lugar a proteínas recombinantes particuladas y altamente inmunogénicas que muestrean la superficie de la proteína diana cuando se expresan en E.Coli.
Los dominios estructurales se producen como proteínas solubles en E. Coli o células de mamífero en paralelo a los epítopos lineales SEAL™. Se utiliza un sistema propio de expresión/secreción bacteriana para producir proteínas solubles en el medio de cultivo.
Los ratones inmunizados con inmunógenos estructurales producirán anticuerpos que pueden reconocer unos pocos epítopos conformacionales dominantes de las proteínas diana. Este tipo de anticuerpos suele tener más éxito en aplicaciones como la IP, la citometría de flujo o los estudios funcionales.
Los ratones inmunizados con antígenos epitópicos IEF-SEAL™ mediante una inmunización patentada y optimizada con sólo una pequeña cantidad de antígenos producen respuestas inmunitarias IgG de alta afinidad en tres semanas. Las células del bazo de los ratones sacrificados se fusionan con células SP2/0 y se analizan mediante ELISA competitivo cuantitativo para seleccionar líneas celulares de hibridoma que segreguen anticuerpos que reconozcan específicamente las secuencias epitópicas con una afinidad mínima nanomolar. A continuación, los hibridomas seleccionados se someten a múltiples rondas de subclonación para establecer líneas celulares estables.
Los productos de la biblioteca de anticuerpos monoclonales SEAL™ están diseñados para maximizar la tasa de éxito en el desarrollo de anticuerpos de trabajo para diversas aplicaciones, y se ofrecen 4 tipos estándar de bibliotecas SEAL para lograrlo. Estos productos difieren en:
- el número y el tipo (péptidos o proteínas) de antígenos utilizados para la inmunización
- el número de epítopos objetivo
- el número de anticuerpos suministrados a los clientes
A continuación se ofrece una comparación de productos y algunas reglas de selección útiles:
