NeoTaqII ADN polimerasa
Descripción
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Condiciones de almacenamiento
- Todos los componentes deben almacenarse a -20°C en un congelador sin ciclos de descongelación para garantizar una vida útil máxima.
- La enzima permanece estable a 4°C o a temperatura ambiente hasta 3 días sin comprometer su estabilidad.
- El producto permanecerá estable hasta la fecha de caducidad si se almacena como se especifica.
Definición de la unidad
- Una unidad de la enzima se define como la cantidad necesaria para catalizar la incorporación de 10 nmoles de dNTPs en material insoluble en ácido en 30 minutos a 72 °C en condiciones de ensayo controladas.
Concentración de enzimas
- La concentración de enzima es de 5 U/μL, disuelta en glicerol.
Solución de cloruro de magnesio
- Una solución de MgCl2 50 mM suministrada permite a los usuarios optimizar la concentración de Mg2+ en las configuraciones de PCR.
- Una concentración de 2,5 mM MgCl2 es generalmente eficaz con la ADN polimerasa Taq II de Neo Biotech.
- Después de la descongelación, agitar la solución de MgCl2.
Diseño de cebadores
- Los cebadores de la PCR deben tener entre 15 y 30 bases y flanquear la región de interés.
- Los cebadores deben contener un 40-60% de GC y evitar secuencias que puedan producir una estructura secundaria interna.
- Los extremos 3'de los cebadores no deben ser complementarios para evitar la formación de dímeros de cebadores.
- Evite tres nucleótidos G o C consecutivos cerca del extremo 3' para evitar el recocido inespecífico del cebador.
- Lo ideal es que ambos cebadores tengan temperaturas de fusión (Tm) casi idénticas para un recocido eficaz.
Plantilla de ADN
- La cantidad recomendada de molde de ADN genómico es de 10 ng a 500 ng, pero pueden utilizarse cantidades tan pequeñas como 5 pg.
- Cantidades inferiores pueden ser suficientes para la amplificación de ADN menos complejo (1-20 ng).
- Cuando utilice ADNc de síntesis como molde, no exceda el 10% del volumen final de la reacción de PCR.
Ensayos de control de calidad
- Se comprueba la pureza de la ADN polimerasa Taq II, con una pureza >90% determinada por electroforesis en gel de poliacrilamida SDS y tinción con azul de Coomassie.
- La contaminación por ADN genómico se evalúa mediante PCR y no debe ser detectable.
Ensayos de nucleasas
- Los ensayos de nucleasas se realizan utilizando ADN plasmídico pNZY28 y ADN polimerasa Taq II de Neo Biotech, seguidos de visualización en un gel de agarosa teñido con GreenSafe Premium.
- No debe observarse ningún corte visible del ácido nucleico. Se realizan pruebas similares con el tampón de reacción y la solución de MgCl2.
Ensayo funcional
- El rendimiento de la ADN polimerasa Taq II ha sido ampliamente probado en la amplificación por PCR de fragmentos de ADN de diferentes tamaños a partir de ADN genómico humano.
- Los productos de PCR resultantes deben aparecer como bandas únicas en una agarosa teñida.