Reactivos e instrumentos para inmunología, biología celular y biología molecular.
 
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Western blot protocol

Western blot protocol

 

Productos necesarios:
 
Preparación de proteínas y separación por electroforesis en gel
  1. Extraer un pequeño volumen de muestra de proteína para determinar la concentración de proteína
  2. Tomar 20 µg de proteínas y añadir Laemmli
  3. Hervir 5 minutos a 95°C, luego centrifugar los tubos
  4. Cargar un volumen igual de proteínas en los pocillos del gel SDS-PAGE (acrilamida%depende del tamaño de la proteína objetivo), sin olvidar un pocillo para las escalas de peso de control.
  5. Migración a amperaje constante con amortiguador adecuado

Transferencia de proteínas del gel a la membrana
  1. Coloque el sándwich (gel/membrana/papel secante) en la caja de transferencia y asegúrese de que no quedan burbujas de aire.
  2. Transferencia a tensión constante con el búfer adecuado


Incubación y revelación de anticuerpos
  1. Teñir la membrana con rojo Ponceau para comprobar la calidad de la transferencia de proteínas.
  2. Retirar la membrana e incubar en solución de bloqueo.
  3. Incubar toda la noche con el anticuerpo primario a 4°C.
  4. Rince la mancha
  5. Incubar con el anticuerpo secundario 1h a temperatura ambiente
  6. Rince la membrana
  7. Aplicar el sustrato al blot