NeoStress

El ensayo de células vivas antioxidantes Neostress se desarrolló a partir de la tecnología Light Up Cell System, que permite una monitorización precisa de la producción intracelular de ROS. La tecnología se ha optimizado para un alto rendimiento en placas de 96 y 384 pocillos, aptas para lectores de fluorescencia comerciales según un protocolo sencillo que se limita a la adición de la Solución A1 en el medio de cultivo y veinte series de mediciones de iluminación/fluorescencia.

Mecanismo

Neostress se basa en la activación de un fotosensibilizador intracelular en un protocolo que sólo requiere una sucesión de destellos de luz y lecturas de fluorescencia. El proceso se denomina light-up cell system porque el nivel de fluorescencia del biosensor aumenta durante su fotoinducción por iluminación. El biosensor entra pasivamente en las células, pero es eliminado rápidamente de las células funcionales por proteínas transportadoras de eflujo, lo que da lugar a una señal fluorescente baja. Cuando se aplica la luz, la fotoinducción del biosensor genera ROS intracelulares, que alteran la homeostasis celular o la capacidad de la célula para liberar el biosensor, desencadenando su entrada masiva en el interior de las células y dando lugar a un aumento de la señal de fluorescencia. El aumento de fluorescencia se retrasa o suprime en células previamente incubadas con una sustancia antioxidante que actúa neutralizando los radicales libres producidos por las células bajo iluminación.

Características:  

• Para 400 puntos de medida en placas de 96 pocillos
• Procedimiento en un solo paso
• Sin lavados
• Almacenamiento a 4°C
• Tiempo hasta caducidad 6 meses tras la recepción
• Procedimiento estándar para la mayoría de células primarias, hiPSCs, líneas celulares inmortalizadas,... (kit de optimización disponible si es necesario)
• Puede utilizarse en multiplexación

Protocolo general del ensayo

1. Preparar muestras 10X concentradas
2. Para la condición de control positivo, añadir 63μL de medio de cultivo sin suero en el tubo de Solución B. Mezclar con la pipeta
3. Retire el medio de cultivo de las células y, a continuación, añada 90μL de medio de cultivo sin suero
4. Añadir 10μL de control positivo y condiciones de muestra a los pocillos
5. Incubar durante 1h en la incubadora
6. Para 96 pocillos, preparar 3,13μL de Solución A1 + 2596,9μL de medio de cultivo sin suero. Mezclar con la pipeta
7. Añadir 25μL de esta Solución A1 diluida por pocillo. Evitar la exposición a la luz excesiva durante este paso y los siguientes.
8. Incubar la placa en el tiempo determinado durante el protocolo de optimización a temperatura ambiente.
9. Leer la fluorescencia (Fpre) a las siguientes longitudes de onda:
10. λExcitación= 505nm (±10nm)
11. λEmisión= 535nm (±10nm)
12. Iluminar la placa utilizando el iluminador AOP (AOPLight B1 o AOPLight HTS).
13. Leer la fluorescencia (Fpost)
14. Repetir los pasos 10 y 11 veinte veces

N.B.: La fluorescencia no específica puede medirse leyendo la fluorescencia antes del paso 6.

Seguridad

Este producto es sólo para fines de investigación y no para uso humano o terapéutico. Potencialmente nocivo. Evitar la exposición prolongada o repetida. Evítese el contacto con los ojos, la piel o la ropa. Lávese a fondo después de manipularlo. En caso de contacto con los ojos o la piel, lavar las zonas afectadas con abundante agua durante 15 minutos y acudir al médico. En caso de inhalación o ingestión, trasládese al aire libre y acúdase inmediatamente al médico.

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