Prueba de fijación del complemento (CFT)
Los antígenos fúngicos y los controles positivos se utilizan para detectar anticuerpos en el suero de los pacientes mediante el procedimiento de fijación del complemento (FC) para ayudar al diagnóstico de cuatro enfermedades fúngicas específicas: histoplasmosis, blastomicosis, coocidioidomicosis y aspergilosis.
El principio de la prueba CF es que los anticuerpos presentes en el suero de los pacientes, cuando se mezclan con los antígenos correspondientes, "fijan" o se unen al complemento (un componente del suero fresco). La "fijación" del complemento se determina utilizando un sistema de ensayo consistente en sensibilizar glóbulos rojos de oveja (GRS) con anti-SRC (hemolisina) y medir el porcentaje de lisis de los GRS (el complemento no fijado inicia la lisis). Si todo el complemento se ha "fijado", las células SRBC no se habrán lisado.
El ensayo de CF implica 2 principios básicos:
1. El complemento (C) se une (fija) de forma irreversible a determinadas clases de complejos anticuerpo-antígeno (algunas clases de anticuerpos no fijan el complemento). El grado de fijación depende de la concentración relativa de anticuerpo o antígeno.
2. La lisis de los glóbulos rojos sensibilizados a la hemolisina depende de la presencia de complemento no fijado.
La prueba CF se interpreta de la siguiente manera
- Anticuerpo presente = sin hemólisis
- Anticuerpo ausente = hemólisis
Los sueros de los pacientes deben analizarse con cada uno de los antígenos, ya que existe cierto solapamiento en la antigenicidad entre los diferentes hongos y los síntomas de la enfermedad son muy similares. Suelen observarse títulos más altos de FC en los sueros de los pacientes cuando se analizan frente al mismo antígeno que el agente etiológico de sus infecciones.
Materiales disponibles:
1. Antígenos diluidos
Estos antígenos están prediluidos a la concentración óptima para su uso en el procedimiento LBCF y están listos para su uso tal como se suministran. Las diluciones óptimas para estos antígenos se han determinado mediante "titulación en caja" frente a sueros de casos de micosis demostrada con títulos conocidos. Los antígenos óptimamente diluidos están disponibles como sigue:
Referencia
Descripción
Envase
2. Controles de anticuerpos
Los controles positivos proceden de cabras hiperinmunizadas. Cada control positivo debe dar un título de 1:32 (+/- 1 dilución) con su antígeno homólogo diluido óptimamente. El control negativo debe ser negativo en la prueba de la fibrosis quística con todos los antígenos.
Referencia
Descripción
Envase