Anticorpi frammentati
Gli anticorpi secondari sono anticorpi che si legano agli anticorpi primari o a frammenti di anticorpi.
Gli anticorpi secondari frammentati sono anticorpi che sono stati digeriti enzimaticamente per rimuovere la regione Fc dell'anticorpo, lasciando solo i frammenti Fab o F(ab')2 che legano l'antigene.
Questi frammenti sono monovalenti o divalenti, rispettivamente, e possono essere utilizzati per bloccare le immunoglobuline endogene su cellule, tessuti o altre superfici e per bloccare le immunoglobuline esposte in esperimenti di etichettatura multipla utilizzando anticorpi primari della stessa specie. Possono anche essere utilizzati per etichettare gli anticorpi primari prima dell'incubazione con il campione sperimentale. I vantaggi dell'uso di anticorpi secondari frammentati includono l'eliminazione del legame non specifico tra le porzioni Fc degli anticorpi e i recettori Fc delle cellule, una migliore penetrazione dell'antigene nei tessuti e la riduzione dello sfondo del legame dell'anticorpo primario negli esperimenti di doppia colorazione.
I vantaggi dell'utilizzo di anticorpi secondari con frammenti Fab includono:
- Eliminazione del legame non specifico tra le porzioni Fc degli anticorpi e i recettori Fc delle cellule, particolarmente importante quando si lavora con cellule vive.
- Facilitare una migliore penetrazione dell'antigene nei tessuti, importante per gli esperimenti di immunoistochimica (IHC).
- Riduzione dello sfondo dovuto al legame dell'anticorpo primario negli esperimenti di doppia colorazione.
- Consentono la coniugazione diretta con le etichette rilevabili attraverso i loro gruppi sulfidrilici, garantendo che il sito di legame attivo dell'anticorpo non venga alterato.
