La colorazione Oil Red O si basa sull'uso di un liso-cromo (colorante liposolubile) e di un colorante azoico utilizzato per la visualizzazione di trigliceridi neutri e sezioni di tessuto lipidico.

L'Oil Red O è uno dei coloranti Sudan come il Sudan III, il Sudan IV e il Sudan Black B. Tuttavia, l'Oil Red O ha gradualmente sostituito i coloranti Sudan III e Sudan IV perché la colorazione rossa prodotta dall'Oil Red O è molto più intensa, il che facilita la visualizzazione.

La colorazione Oil Red O viene eseguita su campioni freschi o congelati. I tessuti inclusi in paraffina non sono compatibili con questa colorazione perché la preparazione dei tagli e soprattutto l'uso di solventi eliminano i lipidi.

La colorazione Oil Red O si basa sull'uso di 4 reagenti per la colorazione delle cellule adipose secondo il metodo di Johnson.