Coloranti per microscopia a super-risoluzione
Coloranti CF® per la microscopia a super-risoluzione multicolore
Recenti pubblicazioni che mettono a confronto coloranti sintetici per l'imaging a super-risoluzione hanno dimostrato che i coloranti CF® offrono le migliori prestazioni per più metodi. La luminosità superiore, la fotostabilità e le proprietà di commutazione fotochimica di alcuni coloranti CF® sono ideali per SIM 3-D, STORM 3-D e altre tecniche di super-risoluzione.
Il CF®405M di Biotium è risultato essere il colorante fluorescente a breve lunghezza d'onda più luminoso e fotostabile per la SIM. Diversi coloranti CF® che coprono gli spettri del rosso visibile, del rosso lontano e del vicino infrarosso sono stati convalidati per STORM, compresa l'imaging a tre colori con CF®568, CF®647 e CF®680. Si veda Lehmann et al. 2015 e l'elenco completo dei riferimenti alla pagina successiva. Biotium offre un'ampia selezione di anticorpi marcati con coloranti CF®, compresi i secondari a marcatura singola con un basso grado di etichettatura, che risulta essere ottimale per STORM1. Offriamo anche altri coniugati, coloranti reattivi e kit di etichettatura.
Il CF®405M di Biotium è risultato essere il colorante fluorescente a breve lunghezza d'onda più luminoso e fotostabile per la SIM. Diversi coloranti CF® che coprono gli spettri del rosso visibile, del rosso lontano e del vicino infrarosso sono stati convalidati per STORM, compresa l'imaging a tre colori con CF®568, CF®647 e CF®680. Si veda Lehmann et al. 2015 e l'elenco completo dei riferimenti alla pagina successiva. Biotium offre un'ampia selezione di anticorpi marcati con coloranti CF®, compresi i secondari a marcatura singola con un basso grado di etichettatura, che risulta essere ottimale per STORM1. Offriamo anche altri coniugati, coloranti reattivi e kit di etichettatura.
Figura 1. CF®568 (a sinistra) produce immagini migliori di Cy®3b (a destra) nella microscopia STORM 3-D.
Le cellule fissate sono state colorate con un anticorpo anti-tubulina di topo seguito da anticorpi secondari antimouse coniugati con coloranti. Vedere la legenda della Figura 2 per le condizioni di imaging. Le molecole di colorante sono state fotosegnalate e immaginate con un laser a 560 nm; un laser a 405 nm è stato utilizzato per favorire la riattivazione del colorante allo stato di emissione.
Le cellule fissate sono state colorate con un anticorpo anti-tubulina di topo seguito da anticorpi secondari antimouse coniugati con coloranti. Vedere la legenda della Figura 2 per le condizioni di imaging. Le molecole di colorante sono state fotosegnalate e immaginate con un laser a 560 nm; un laser a 405 nm è stato utilizzato per favorire la riattivazione del colorante allo stato di emissione.
Figura 2. Confronto tra la microscopia convenzionale a campo largo (a sinistra) e STORM (a destra) con l'uso di coniugati di coloranti CF®.
Le cellule fissate sono state colorate con un anticorpo anti-tubulina di topo seguito da un anticorpo secondario anti-topo coniugato con colorante CF® (riga superiore: CF®647, riga centrale: CF®660C, riga inferiore: CF®680). Per lo STORM, i campioni sono stati sigillati in un tampone che conteneva il 5% (w/v) di glucosio, 100 mM di cisteamina, 0,8 mg/mL di glucosio ossidasi e 40 μg/mL di catalasi, in Tris-HCl (pH 7,5). I campioni sono stati analizzati su un microscopio Nikon Ti-Eclipse w/ PFS con un obiettivo CFI Plan Apo Lambda 100x. Le molecole di colorante sono state fotosegnalate e immaginate con un laser a 647 nm; un laser a 405 nm è stato utilizzato per favorire la riattivazione del colorante allo stato di emissione. L'emissione è stata raccolta con una fotocamera EMCCD Andor iXon Ultra 897 per un totale di 100.000 fotogrammi per immagine a una frequenza di 110 Hz.
Le cellule fissate sono state colorate con un anticorpo anti-tubulina di topo seguito da un anticorpo secondario anti-topo coniugato con colorante CF® (riga superiore: CF®647, riga centrale: CF®660C, riga inferiore: CF®680). Per lo STORM, i campioni sono stati sigillati in un tampone che conteneva il 5% (w/v) di glucosio, 100 mM di cisteamina, 0,8 mg/mL di glucosio ossidasi e 40 μg/mL di catalasi, in Tris-HCl (pH 7,5). I campioni sono stati analizzati su un microscopio Nikon Ti-Eclipse w/ PFS con un obiettivo CFI Plan Apo Lambda 100x. Le molecole di colorante sono state fotosegnalate e immaginate con un laser a 647 nm; un laser a 405 nm è stato utilizzato per favorire la riattivazione del colorante allo stato di emissione. L'emissione è stata raccolta con una fotocamera EMCCD Andor iXon Ultra 897 per un totale di 100.000 fotogrammi per immagine a una frequenza di 110 Hz.
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