NeoProof DNA polimerasi

Componenti e stoccaggio dei prodotti

• Fornito con un tampone di reazione 10× e una soluzione stabilizzante 5×.
• Conservazione consigliata a -20 °C in un congelatore a temperatura costante
• Stabilità fino alla data di scadenza se conservato come specificato
• Definizione dell'unità: incorporazione di 10 nmoli di dNTP in 30 minuti a 72 °C

Protocollo PCR

• Protocollo standard fornito come linea guida generale per l'amplificazione PCR.
• Linee guida per l'impostazione della reazione, incluso l'ordine dei componenti e l'assemblaggio in ghiaccio
• Parametri di ciclaggio per denaturazione, annealing ed estensione
• Elettroforesi su gel per analizzare i prodotti della PCR

Considerazioni sulla progettazione della PCR

• Progettazione di primer PCR di lunghezza adeguata (15-30 basi)
• Raccomandazioni per le sequenze di primer per migliorare la resa della PCR ed evitare la degradazione
• Linee guida per il contenuto di GC dei primer e per evitare la struttura secondaria interna
• Raccomandazioni per prevenire la formazione di primer-dimeri e l'annealing non specifico del primer
• Importanza di temperature di fusione (Tm) simili per entrambi i primer

Modello di DNA

• Quantità raccomandate di materiale di partenza in base a qualità e complessità
• Linee guida per l'utilizzo di templati di DNA genomico e templati di reazione di sintesi di cDNA
• Attenzione a non superare il 10% del volume finale della reazione di PCR per i templati di cDNA.

Concentrazione dell'enzima

• Concentrazione enzimatica raccomandata di 1,25 U (0,5 μL) in una reazione da 50 μL
• Volumi di enzima più elevati (fino a 2,5 U) per l'amplificazione di templato abbondante (>50 ng gDNA)
• Opzioni di diluizione per comodità durante l'assemblaggio della PCR

Saggi di controllo qualità

• Valutazione della purezza mediante SDS-PAGE e colorazione con Coomassie Blue
• Valutazione della contaminazione del DNA genomico mediante PCR
• Saggi nucleasici per verificare la presenza di scalfitture o tagli degli acidi nucleici
• Saggio funzionale utilizzando frammenti di DNA di diverse dimensioni da DNA genomico umano