NeoTaqII DNA polimerasi

Descrizione

La nuova generazione di DNA polimerasi derivate dalla Taq NB-60-0005 ottimizzato per applicazioni PCR standard.
Progettato per produrre elevate rese di DNA in tempi di esecuzione della PCR più brevi (15-30 s/kb di estensione).
Manca dell'attività esonucleasica 3´→5´ e supporta l'amplificazione affidabile di un'ampia gamma di modelli di DNA fino a 6 kb.
Adatto per PCR in condizioni di minima ottimizzazione.

Condizioni di conservazione

Tutti i componenti devono essere conservati a -20°C in un congelatore senza cicli di scongelamento per garantire la massima durata di conservazione.
L'enzima rimane stabile a 4°C o a temperatura ambiente per un massimo di 3 giorni senza compromettere la sua stabilità.
Il prodotto rimarrà stabile fino alla data di scadenza se conservato come specificato.

Definizione dell'unità

Un'unità dell'enzima è definita come la quantità necessaria per catalizzare l'incorporazione di 10 nmoli di dNTP in materiale insolubile in acido in 30 minuti a 72 °C in condizioni di saggio controllate.

Concentrazione dell'enzima

Soluzione di cloruro di magnesio

Una soluzione di MgCl2 da 50 mM in dotazione consente agli utenti di ottimizzare la concentrazione di Mg2+ nelle configurazioni di PCR.
Una concentrazione di 2,5 mM di MgCl2 è generalmente efficace con la DNA polimerasi Neo Biotech Taq II.
Agitare accuratamente la soluzione di MgCl2 dopo lo scongelamento.

Progettazione dei primer

I primer PCR devono avere un range di 15-30 basi e affiancare la regione di interesse.
I primer devono avere un contenuto di GC del 40-60% ed evitare sequenze che possano produrre una struttura secondaria interna.
Le estremità 3'- dei primer non devono essere complementari per evitare la formazione di primer-dimeri.
Evitare tre nucleotidi G o C consecutivi in prossimità dell'estremità 3'per evitare l'annealing non specifico del primer.
Idealmente, entrambi i primer dovrebbero avere temperature di fusione (Tm) quasi identiche per un'annealing efficiente.

Modello di DNA

La quantità di DNA genomico raccomandata va da 10 ng a 500 ng, ma è possibile utilizzare anche solo 5 pg.
Quantità inferiori possono essere sufficienti per l'amplificazione di DNA meno complesso (1-20 ng).
Quando si usa il cDNA di sintesi come templato, non superare il 10% del volume finale della reazione di PCR.

Saggi di controllo qualità

La Taq II DNA polimerasi è testata per la purezza, con una purezza >90% determinata dall'elettroforesi su gel di poliacrilammide SDS e dalla colorazione con Coomassie Blue.
La contaminazione del DNA genomico viene valutata mediante PCR e non deve essere rilevabile.

Saggi di nucleasi

I test nucleasici vengono eseguiti utilizzando il DNA plasmidico pNZY28 e la DNA polimerasi Neo Biotech Taq II, seguiti dalla visualizzazione su un gel di agarosio colorato con GreenSafe Premium.
Non si deve osservare alcuna scalfittura o taglio visibile dell'acido nucleico. Test analoghi vengono condotti con il tampone di reazione e la soluzione di MgCl2.

Saggio funzionale

La DNA polimerasi Taq II è stata ampiamente testata per le sue prestazioni nell'amplificazione PCR di frammenti di DNA di diverse dimensioni da DNA genomico umano.
I prodotti di PCR risultanti devono apparire come bande singole su agarosio colorato.