Test di fissazione del complemento (CFT)

Gli antigeni fungini e i controlli positivi vengono utilizzati per rilevare gli anticorpi nei sieri dei pazienti mediante la procedura di fissazione del complemento (CFT) per facilitare la diagnosi di quattro specifiche malattie fungine: istoplasmosi, blastomicosi, coocidioidomicosi e aspergillosi.

 

Il principio del test CF è che gli anticorpi presenti nei sieri dei pazienti, quando vengono mescolati con gli antigeni corrispondenti, "fissano", o legano, il complemento (un componente del siero fresco). Il "legame" del complemento viene determinato utilizzando un sistema di analisi costituito da globuli rossi di pecora (SRBC) sensibilizzati con anti-SRC (emolisina) e misurando la percentuale di lisi degli SRBC (il complemento non legato avvia la lisi). Se tutto il complemento è stato "fissato", le cellule SRBC non saranno lise.

 

 

1. Il complemento (C) è irreversibilmente legato (fissato) da alcune classi di complessi anticorpo-antigene (alcune classi di anticorpi non fissano il complemento). Il grado di legame dipende dalla concentrazione relativa di anticorpo o antigene.

 

2. La lisis de los glóbulos rojos sensibilizados a la hemolisina depende de la presencia de complemento no fijado.

 

• Anticorpo presente=nessuna emolisi
• Anticorpo assente=emolisi

 

I sieri dei pazienti devono essere testati con ciascuno degli antigeni, poiché vi è una certa sovrapposizione di antigenicità tra i diversi funghi e i sintomi della malattia sono molto simili. In genere si osservano titoli di CF più elevati nei sieri dei pazienti quando vengono testati contro lo stesso antigene dell'agente eziologico delle loro infezioni.

 

 

 

 

Questi antigeni sono pre-diluiti alla concentrazione ottimale per l'uso nella procedura LBCF e sono pronti all'uso come forniti. Le diluizioni ottimali di questi antigeni sono state determinate mediante "titolazione in box" con sieri provenienti da casi di micosi accertata con titoli noti. Gli antigeni diluiti in modo ottimale sono disponibili come segue:

 

 

I controlli positivi sono derivati da capre iperimmunizzate. Ogni controllo positivo deve dare un titolo di 1:32 (+/- 1 diluizione) con il suo antigene omologo diluito in modo ottimale. Il controllo negativo deve risultare negativo al test FC con tutti gli antigeni.