Kit per la determinazione della crescita cellulare
Test MTT basato sull'attività mitocondriale
È stato dimostrato che la proliferazione cellulare ha molteplici funzioni nello sviluppo e nella formazione dei modelli, tra cui ruoli nella crescita, nella morfogenesi e nell'espressione genica.
I metodi comunemente utilizzati a questo scopo sono il conteggio all'emocitometro, la determinazione del contenuto proteico, la misurazione del peso umido o secco e la determinazione della densità ottica (OD). Mentre la conta emocitometrica e la determinazione delle proteine hanno lo svantaggio di essere lunghe e noiose, la misurazione del peso umido o anche secco non è pratica per volumi di coltura molto piccoli.
Un metodo alternativo si basa sulla trasformazione e sulla quantificazione colorimetrica dell'MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio bromuro]. La catena respiratoria e altri sistemi di trasporto degli elettroni riducono l'MTT e altri sali di tetrazolio, formando così cristalli di formazan viola non idrosolubili all'interno della cellula. La quantità di questi cristalli può essere determinata spettrofotometricamente e serve a stimare il numero di mitocondri e quindi il numero di cellule vive nel campione. Queste caratteristiche possono essere sfruttate nei test di citotossicità o di proliferazione cellulare, ampiamente utilizzati in immunologia, tossicologia e biologia cellulare.
Principio :
Il principio del saggio MTT si basa sull'attività mitocondriale. Per le cellule vitali, l'attività mitocondriale è costante e quindi un aumento o una diminuzione del numero di cellule vitali è linearmente correlato all'attività mitocondriale. L'attività mitocondriale delle cellule si riflette nella conversione del sale di tetrazolio MTT in cristalli di formazan, che possono essere solubilizzati per una misurazione omogenea. Pertanto, qualsiasi aumento o diminuzione del numero di cellule vitali può essere rilevato misurando la concentrazione di formazan in modo spettrofotometrico utilizzando un lettore di piastre a 570 nm vs 690 nm.
Componenti del kit : Soluzione MTT + solvente MTT
