PCR Conventionnelle
La PCR (Polymerase Chain Reaction) est un test in vitro pour la réplication de l'ADN qui permet à une séquence "cible" d'ADN d'être sélectivement amplifiée plusieurs millions de fois en quelques heures.
Une réaction de PCR classique nécessitent différents composants et réactifs. Ces composants inclus :
- Echantillon d'ADN contenant la région d'ADN (Cible) à amplifier
- ADN polymerase, qui doit être résistante à la température pour pouvoir rester intacte pendant le processus de dénaturation de l'ADN
- 2 amorces (primers) qui sont complémentaires des extrémités 3' des brins sens et anti-sens de l'ADN cible (l'ADN polymérase peut uniquement se lier et procéder à l'élongation d'un double brin d'ADN et sans les amorces l'élongation est impossible)
- Desoxynucléotides triphosphate (dNTP), qui représentent les briques de construction nécessaire à l'ADN polymérase pour synthétiser un nouveau brin d'ADN
- Solution tampon, qui apporte un environnement chimique suffisant pour une activité et une stabilité optimale de l'ADN polymérase
- Cations bivalents, ions magnésium ou manganèse. Généralement se sont les ions Mg2+ qui sont utilisés mais les ions Mn2+ peuvent également être utilisés pour la mutagenèse
- Ions potassium monovalents
 | Typiquement, la PCR consiste en une série de 20-40 changements de température, appelés cycles. Chaque cycle consiste en 2-3 étapes à températures différentes. Les cycles sont précédés par une étape à haute température (>90 °C), et suivis une étape finale d'extension. Les températures utilisées ainsi que le temps appliqués à chaque cycle dépendent de plusieurs paramètres. Ceci inclu l'enzyme utilisée pour la synthèse de l'ADN, la concentration des ions divalents et des dNTPs et la température d'hybridation (Tm) des amorces.
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