ADN polymérases pour PCR haute-fidélité

La PCR haute-fidélité est fréquemment utilisée pour le clonage et la mutagenèse. Cependant, les Taq polymérases standard ne peuvent pas être utilisée car elles font trop d'erreurs pendant l'amplification.

Les ADN polymérases haute-fidélité sont importantes pour les applications pour lesquelles la séquence d'ADN doit être correcte après l'amplification. Ces applications comprennent le clonage et le sous-clonage d'ADN pour l'expression de protéines, l'analyse des SNPs et le séquençage nouvelle génération (NGS). On parle alors de l'importance de la fidélité de l'ADN polymérase, cette fidélité est moins importante pour les applications ne visant qu'à prouver la présence ou l'absence d'une séquence donnée.

La fidélité de l'ADN polymérase réfère à sa capacité à insérer la bonne base au bon endroit pendant la réaction de PCR. Communément, le taux de mauvaises insertions de nucléotides est connu sous le nom de taux d'erreurs de l'ADN polymérase. La PCR haute-fidélité nécessite une ADN polymérase avec un faible taux d'erreurs et permet un degré élevé de précision dans la replication de l'ADN d'intérêt.

On distingue différents types d'ADN polymérases haute-fidélité dont la Pfu polymérase, une ADN polymérase naturellement fidèle grâce à son activité exonucléase 3'-5' ainsi que des ADN polymérases modifiées pour obtenir des capacités de fidélité supérieures.