Colonnes FPLC pour les protéines taguées GST
La glutathion S-transférase (GST) est une protéine de 211 acides aminés (26 kDa) dont la séquence d'ADN est fréquemment intégrée dans des vecteurs d'expression pour la production de protéines recombinantes. Le résultat de l'expression à partir de ce vecteur est une protéine de fusion marquée par GST dans laquelle la protéine GST fonctionnelle (26 kDa) est fusionnée à l'extrémité N-terminale de la protéine recombinante.
Parce que la GST se replie rapidement en une protéine stable et hautement soluble lors de la traduction, l'inclusion de GST favorise souvent une plus grande expression et une plus grande solubilité des protéines recombinantes en comparaison aux protéines natives. De plus, les protéines de fusion marquées à la GST peuvent être purifiées ou détectées sur la base de la capacité de la GST (une enzyme) à lier son substrat, le glutathion (GSH).
La chromatographie d'affinité utilisant du glutathion-agarose permet une purification rapide, non dénaturante et hautement sélective de protéines contenant des séquences de liaison au glutathion, telles que la glutathion S-transferase (GST), la glutathion peroxydase et la glyoxalase I.
L'élution de la protéine marquée par la GST est effectuée avec du glutathion libre dans le tampon d'élution. L'affinité de la GST pour le glutathion libre est supérieure à celle pour le glutathion immobilisé lié à la matrice d'agarose. Par conséquent, le glutathion libre remplace le glutathion immobilisé qui conduit à la libération de la protéine marquée par la GST de la matrice.
