Extraction de l'ARN
Les méthodes d'extraction des acides nucléiques sont essentielles à la biologie moléculaire et sont couramment utilisées dans de nombreuses applications des sciences médicales et biologiques.
L'extraction des acides nucléiques peut être divisée en 3 étapes, qui peuvent être optimisées en fonction du type d'échantillon et des applications en aval pour lesquelles les acides nucléiques seront utilisés. Ces étapes sont les suivantes :
1) Rupture des structures des tissus et des cellules
2) Élimination des protéines, des lipides et autres contaminants des acides nucléiques
3) Transfert les acides nucléiques dans l'eau ou dans une solution tampon qui les préservera sans interférer avec les travaux ultérieurs
Les méthodes d'extraction des acides nucléiques peuvent être classées en deux types différents :
- Les méthodes en solution (comme la méthode au phénol-chloroforme)
- Les méthodes basées sur la phase solide (comme les billes magnétiques ou les colonnes de centrifugation).
Les méthodes d'extraction en phase solide fonctionnent en faisant en sorte que les acides nucléiques se lient à des supports solides, comme des billes magnétiques recouvertes de silice ou d'autres matériaux. Les billes (ou autres supports) sont ensuite lavées à l'alcool pour éliminer les contaminants. Le support est ensuite lavé avec un liquide qui rend les acides nucléiques à nouveau solubles, ce qui libère l'ADN du support dans un processus connu sous le nom d'élution. Une méthode simple consiste à ajouter une solution contenant un chaotrope à l'extrait brut d'acide nucléique. Les agents chaotropiques sont des molécules qui perturbent le réseau de liaison hydrogène entre les molécules d'eau. En présence de chaotropes, les acides nucléiques sont auparavant beaucoup moins solubles et se fixent au verre, aux billes magnétiques recouvertes de silice et à d'autres supports solides - ce qui permet de les séparer facilement des contaminants. Les méthodes d'extraction en phase solide peuvent également dépendre de la liaison sélective de l'ADN et de l'ARN à des résines échangeuses d'ions ou à d'autres produits chimiques.
