Produits de matrice d'ADN

I. Matériels recquis
Tampons
- Solution de Préhybridation: 5xSSC, 0,1%SDS, 0,1%BSA
- Solution d'hybridation 2x: 40-70%Formamide, 10xSSC, 0,2% SDS, 0,02%d'ADN de sperme de saumon (optionnel)
- Solution de lavage 1: 2xSSC, 0,1%SDS
- Solution de lavage 2: 0,1xSSC, 0,1%SDS
- Solution de lavage 3: 0,1xSSC
Matériel

- Boites pour la préhybridation et l'hybridation
- Chambre d'hybridation
- Micropipettes monocanal de 20 µl à 1.000 µl avec embouts jetables
- Pipettes graduées de 5 ml et 10 ml
- Bain marie
II. Durée de l'expérimentation
- 30 min de préhybridation
- 12 à 16 heures d'hybridation
- 10 min de lavages
- TOTAL : 13 à 17 heures
III. Mode opératoire
Préhybridation
1. Préparer un volume approprié de Solution de Préhybridation.
Note: Le volume recquis est fonction de la boite utilisée, le niveau doit atteindre la code-barre de la lame.
2. Pré-chauffer la solution à 55°C.
3. Mettre les lames dans la solution et incuber 30 min sous agitation.
4. Rincer 5 fois à l'H2O
Hybridation standard
1. Préparer la Solution d'Hybridation 2x
2. Mélanger l'échantillon marqué avec la solution d'Hybridation 2x
3. Ajuster la volume pour arriver à une concentration de 1x et mélanger
4. Incuber 2 min à 95°C
5. Mettre sur la lame et la placer dans la chambre d'hybridation
6. Incuber 12 à 16 heures à 42°C
Lavage Hybridation
1. Préparer les solutions de lavages 1, 2 et 3.
2. Retirer la lame de la chambre d'hybridation et la mettre dans la solution de lavage 1
3. Incuber sous agitation pendant 5 min
4. Transférer dans la solution 2 et incuber en agitant pendant 5 min
5. Transférer dans le premier volume de solution 3 et incuber en agitant pendant 1 min
6. Répéter l'étape 5.