Colorants pour microscopie super-résolution
CF® Dyes pour la microscopie multicolore super-résolution
Des publications récentes comparant des colorants synthétiques pour l'imagerie à super-résolution ont montré que les colorants CF® donnent les meilleures performances pour de multiples méthodes. La luminosité, la photostabilité et les propriétés de commutation photochimique supérieures de certains colorants CF® sont idéales pour les techniques SIM 3D, STROM 3D et autres techniques de superrésolution.
Le CF®405M de Biotium s'est avéré être le colorant fluorescent à courte longueur d'onde le plus brillant et le plus photostable pour la SIM. Plusieurs colorants CF® couvrant les spectres rouge visible, rouge lointain et proche infrarouge ont été validés pour la STORM, y compris l'imagerie trois couleurs avec CF®568, CF®647 et CF®680 (Voir Lehmann et al. 2015, et la liste complète des références à la page suivante). Biotium offre une vaste sélection d'anticorps marqués avec un colorant CF®, y compris des anticorps secondaires à marquage unique avec un faible degré de marquage, ce qui est considéré comme optimal pour STORM1, ainsi que d'autres conjugués, des colorants réactifs et des kits de marquage.
Figure 1. Le CF®568 (à gauche) produit de meilleures images que le Cy®3b (à droite) en microscopie 3D STORM.
Les cellules fixées ont été colorées avec un anticorps anti-tubuline de souris suivi par un anticorps secondaire anti-souris conjugué à un colorant. Voir la légende de la Figure 2 pour les conditions d'imagerie. Les molécules de colorant ont été photoswitchées et imagées à l'aide d'un laser de 560 nm ; un laser de 405 nm a été utilisé pour aider la réactivation du colorant à l'état émetteur.
Figure 2. Comparaison de la microscopie conventionnelle à champ large (à gauche) avec la microscopie STORM (à droite) utilisant des conjugués de colorants CF®.
Les cellules fixées ont été colorées avec un anticorps anti-tubuline de souris suivi d'un anticorps secondaire anti-souris conjugué à un colorant CF® (rangée supérieure : CF®647, rangée centrale : CF®660C, rangée inférieure : CF®680). Pour STORM, les échantillons ont été scellés dans un tampon contenant 5%(p/v) de glucose, 100 mM de cystéamine, 0,8 mg/mL de glucose oxydase et 40 μg/mL de catalase, dans Tris-HCl (pH 7,5). Des échantillons ont été imagés sur un microscope Nikon Ti-Eclipse avec microscope PFS avec un objectif à huile Plan Apo Lambda 100x de la FCI. Les molécules de colorant ont été photoswitchées et imagées à l'aide d'un laser de 647 nm ; un laser de 405 nm a été utilisé pour aider la réactivation du colorant à l'état émetteur. L'émission a été collectée avec une caméra Andor iXon Ultra 897 EMCCD pour un total de 100 000 images par image à une fréquence de 110 Hz.
CF® Dyes et produits associés :