NeoProof ADN polymérase

Composants du produit et stockage

• Fourni avec un tampon de réaction 10× et une solution stabilisatrice 5×.
• Stockage recommandé à -20 °C dans un congélateur à température constante.
• Stabilité jusqu'à la date de péremption si le produit est stocké comme indiqué.
• Définition de l'unité : incorporation de 10 nmoles de dNTP en 30 minutes à 72 °C.

PCR Protocole

• Protocole standard fourni à titre d'orientation générale pour l'amplification par PCR.
• Directives pour la préparation de la réaction, y compris l'ordre des composants et l'assemblage sur glace.
• Paramètres de cyclage pour la dénaturation, le recuit et l'extension.
• Électrophorèse sur gel pour l'analyse des produits PCR.

Considérations relatives à la conception de la PCR

• Conception d'amorces PCR de longueur appropriée (15-30 bases).
• Recommandations pour les séquences d'amorces afin d'améliorer le rendement de la PCR et d'éviter la dégradation.
• Recommandations concernant la teneur en CG des amorces et l'évitement de la structure secondaire interne.
• Recommandations pour éviter la formation de dimères d'amorces et le recuit non spécifique des amorces.
• Importance de températures de fusion (Tf) similaires pour les deux amorces.

Concentration enzymatique

• Concentration enzymatique recommandée de 1,25 U (0,5 μL) dans une réaction de 50 μL.
• Volumes d'enzyme plus élevés (jusqu'à 2,5 U) pour l'amplification de modèles abondants (>50 ng d'ADNg).
• Options de dilution pour plus de commodité lors de l'assemblage de la PCR.

Essais de contrôle de la qualité

• Évaluation de la pureté par SDS-PAGE et coloration au bleu de Coomassie
• Évaluation de la contamination par l'ADN génomique au moyen de la PCR
• Essais de nucléase pour vérifier si les acides nucléiques sont coupés ou entaillés
• Essai fonctionnel utilisant des fragments d'ADN de différentes tailles provenant d'ADN génomique humain