Colorants pour microscopie super-résolution
CF® Dyes pour la microscopie multicolore super-résolution
Des publications récentes comparant des colorants synthétiques pour l'imagerie à super-résolution ont montré que les colorants CF® donnent les meilleures performances pour de multiples méthodes. La luminosité, la photostabilité et les propriétés de commutation photochimique supérieures de certains colorants CF® sont idéales pour les techniques SIM 3D, STROM 3D et autres techniques de superrésolution.
Le CF®405M de Biotium s'est avéré être le colorant fluorescent à courte longueur d'onde le plus brillant et le plus photostable pour la SIM. Plusieurs colorants CF® couvrant les spectres rouge visible, rouge lointain et proche infrarouge ont été validés pour la STORM, y compris l'imagerie trois couleurs avec CF®568, CF®647 et CF®680 (Voir Lehmann et al. 2015, et la liste complète des références à la page suivante). Biotium offre une vaste sélection d'anticorps marqués avec un colorant CF®, y compris des anticorps secondaires à marquage unique avec un faible degré de marquage, ce qui est considéré comme optimal pour STORM1, ainsi que d'autres conjugués, des colorants réactifs et des kits de marquage.
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Figure 1. Le CF®568 (à gauche) produit de meilleures images que le Cy®3b (à droite) en microscopie 3D STORM.
Les cellules fixées ont été colorées avec un anticorps anti-tubuline de souris suivi par un anticorps secondaire anti-souris conjugué à un colorant. Voir la légende de la Figure 2 pour les conditions d'imagerie. Les molécules de colorant ont été photoswitchées et imagées à l'aide d'un laser de 560 nm ; un laser de 405 nm a été utilisé pour aider la réactivation du colorant à l'état émetteur.
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Figure 2. Comparaison de la microscopie conventionnelle à champ large (à gauche) avec la microscopie STORM (à droite) utilisant des conjugués de colorants CF®.
Les cellules fixées ont été colorées avec un anticorps anti-tubuline de souris suivi d'un anticorps secondaire anti-souris conjugué à un colorant CF® (rangée supérieure : CF®647, rangée centrale : CF®660C, rangée inférieure : CF®680). Pour STORM, les échantillons ont été scellés dans un tampon contenant 5%(p/v) de glucose, 100 mM de cystéamine, 0,8 mg/mL de glucose oxydase et 40 μg/mL de catalase, dans Tris-HCl (pH 7,5). Des échantillons ont été imagés sur un microscope Nikon Ti-Eclipse avec microscope PFS avec un objectif à huile Plan Apo Lambda 100x de la FCI. Les molécules de colorant ont été photoswitchées et imagées à l'aide d'un laser de 647 nm ; un laser de 405 nm a été utilisé pour aider la réactivation du colorant à l'état émetteur. L'émission a été collectée avec une caméra Andor iXon Ultra 897 EMCCD pour un total de 100 000 images par image à une fréquence de 110 Hz.
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