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![Résines d'affinité](https://www.clinisciences.com/upload/thumbs/affinity-3er79p8e-sveHTAst-9d1837.jpeg)
Résines d'affinité
La chromatographie d'affinité repose sur la fixation spécifique et réversible d'une protéine à un ligand lié à la matrice, on parle alors de résine d'affinité. Le ligand peut soit se lier directement à la protéine d'intérêt ou à un tag qui est attaché de manière covalente à la protéine (Histidine, GST ...). La chromatographie d'affinité est souvent la procédure de purification la plus robuste et est généralement utilisée dans les premiers stades de la méthode de purification. En fonction de l'application en aval, la purification par affinité peut être la seule étape de chromatographie nécessaire pour atteindre une pureté adéquate.
Les protéines peuvent être purifiées par chromatographie d'affinité d'une manière sélective ou non sélective. Dans la chromatographie d'affinité sélective, un ligand spécifique d'une protéine ou d'un tag lié de manière covalente est utilisé. Dans la chromatographie d'affinité non sélective comme la protéine A, G, L pour les immunoglobulines, ou de l'héparine pour des protéines liant l'ADN, ou la lectine pour les glycoprotéines, le ligand se lie à un groupe de protéines avec des capacités de liaison similaires.
Les résines disponibles sont :
- Nickel-NTA : pour la purification des protéines taguées histidine
- Cobalt-NTA : pour la purification des protéines taguées histidine
- GST : pour la purification des protéines taguées GST
- Protéine A : pour la purification des anticorps à partir de sérum, d'ascite et de surnageant de culture
- Protéine G : pour la purification des anticorps à partir de sérum, d'ascite et de surnageant de culture