Chromatografieharsen
Het principe van chromatografie is gebaseerd op 2 fasen: de mobiele fase die het monster aandrijft en de stationaire fase die de zuivering mogelijk maakt. De chromatografieharsen vormen deze stationaire fase.
Er zijn verschillende soorten chromatografie, afhankelijk van het type hars dat wordt gebruikt. De vier belangrijkste soorten chromatografie zijn affiniteitschromatografie, ionenuitwisselingschromatografie (IEX), hydrofobe interactiechromatografie (HIC) en grootte-uitsluitingschromatografie (SEC). De meeste zuiveringssystemen vereisen het gebruik van meerdere van deze typen chromatografische procedures om de zuiverheid te bereiken die nodig is voor downstream toepassingen. De keuze van de meest geschikte chromatografische methode(n) en de volgorde van deze methoden is essentieel bij de optimalisatie van een eiwitzuiveringsmethode.
Type chromatografie | Scheidingsprincipe | Interactie | Elutie |
Affiniteit | Specifieke interactie | Geen concurrerend ligand | Concurrerend ligand (specifiek), afbraak van eiwit/eiwit interacties door verandering van omstandigheden (niet-specifiek) |
Ionenwisseling | Netto oppervlaktelading | Lage ionensterkte | Hoge ionensterkte, toenemende (kationen) of afnemende (anionen) pH |
Hydrofobe interacties | Hydrofobiciteit | Hoge ionensterkte | Lage ionensterkte |
Grootte uitsluiting | Hydrodynamische straal |