Gefragmenteerde antilichamen
Secundaire antilichamen zijn antilichamen die zich binden aan primaire antilichamen of antilichaamfragmenten.
Gefragmenteerde secundaire antilichamen zijn antilichamen die enzymatisch verteerd zijn om de Fc-regio van het antilichaam te verwijderen, zodat alleen de antigeenbindende Fab- of F(ab')2-fragmenten overblijven.
Deze fragmenten zijn respectievelijk monovalent of divalent en kunnen worden gebruikt om endogene immunoglobulinen op cellen, weefsels of andere oppervlakken te blokkeren en om de blootgestelde immunoglobulinen te blokkeren in meervoudige labelingsexperimenten met primaire antilichamen van dezelfde soort. Ze kunnen ook worden gebruikt om primaire antilichamen te labelen voorafgaand aan de incubatie met het experimentele monster. De voordelen van het gebruik van secundaire antilichamen met fragmenten zijn onder andere het elimineren van niet-specifieke binding tussen Fc-gedeelten van antilichamen en Fc-receptoren op cellen, het vergemakkelijken van een betere penetratie van antigenen in weefsel en het verminderen van de achtergrond van binding van primaire antilichamen bij experimenten met dubbele kleuring.
De voordelen van het gebruik van Fab-fragment secundaire antilichamen zijn onder andere:
- Het elimineren van niet-specifieke binding tussen Fc-gedeelten van antilichamen en Fc-receptoren op cellen, wat vooral belangrijk is bij het werken met levende cellen.
- Vergemakkelijken van betere penetratie van antigenen in weefsel, wat belangrijk is voor immunohistochemische (IHC) experimenten.
- Vermindering van achtergrond door binding van primaire antilichamen bij experimenten met dubbele kleuring.
- Directe conjugatie met detecteerbare labels mogelijk maken via hun sulfhydrylgroepen, zodat de actieve bindingsplaats van het antilichaam niet wordt aangetast.
