NeoStress

Neostress antioxidant levende cel is ontwikkeld op basis van de Light Up Cell System-technologie die een nauwkeurige controle van intracellulaire ROS-productie mogelijk maakt. De technologie is geoptimaliseerd voor een hoge verwerkingscapaciteit op 96- en 384 wells platen, geschikt voor commerciële fluorescentielezers volgens een eenvoudig protocol dat beperkt is tot de toevoeging van de oplossing A1 in het kweekmedium en twintig runs van belichting/fluorescentiemetingen.

Mechanisme

Neostress  is gebaseerd op de activering van een intracellulaire fotosensibilisator in een protocol dat alleen een opeenvolging van lichtflitsen en fluorescentiemetingen vereist. Het proces wordt light-up celsysteem genoemd omdat het fluorescentieniveau van de biosensor toeneemt tijdens de foto-inductie door verlichting. De biosensor komt passief in de cellen terecht maar wordt snel uit functionele cellen verwijderd door efflux transporteiwitten, wat resulteert in een laag fluorescentiesignaal. Wanneer het licht wordt toegepast, genereert de foto-inductie van de biosensor intracellulaire ROS'en die de celhomeostase of het vermogen van de cel om de biosensor vrij te geven veranderen, waardoor de biosensor massaal de cellen binnendringt en het fluorescentiesignaal toeneemt. De toename in fluorescentie wordt vertraagd of opgeheven in cellen die eerder zijn geïncubeerd met een antioxidant die de vrije radicalen neutraliseert die door de cellen onder belichting worden geproduceerd.

Kenmerken:

• Voor 400 meetpunten in 96-wells platen
• Procedure in één stap
• Geen wasbeurten
• Opslag bij 4°C
• Tijd tot vervaldatum: 6 maanden na ontvangst
• Standaardprocedure voor de meeste primaire cellen, hiPSC's, geïmmortaliseerde cellijnen, ... (optimalisatiekit beschikbaar indien nodig)
• Kan worden gebruikt op multiplexing

Algemeen assayprotocol

1. Bereid monsters 10X geconcentreerd
2. Voor de positieve controle, voeg 63μL van het kweekmedium zonder serum in oplossing B buis. Meng met de pipet
3. Verwijder het kweekmedium uit de cellen en voeg vervolgens 90μL kweekmedium zonder serum toe
4. Voeg 10 µl positieve controle en bemonsteringscondities toe aan de wells.
5. Incubeer gedurende 1 uur in de incubator
6. Bereid voor 96 wells 3,13 μL oplossing A1 + 2596,9 μL kweekmedium zonder serum. Meng met de pipet
7. Voeg 25μL van deze verdunde oplossing A1 per well toe. Vermijd blootstelling aan overmatig licht tijdens deze stap en de volgende stappen.
8. Incubeer de plaat op een bepaald tijdstip tijdens het optimalisatieprotocol bij kamertemperatuur.
9. Lees fluorescentie (Fpre) af bij de volgende golflengten:
10. λExcitatie= 505nm (±10nm)
11. λMissie= 535nm (±10nm)
12. Belicht de plaat met het AOP-belichtingstoestel (AOPLight B1 of AOPLight HTS)
13. Lees de fluorescentie af (Fpost)
14. Herhaal stap 10 en 11 twintig keer

NB: Niet-specifieke fluorescentie kan worden gemeten door fluorescentie af te lezen vóór stap 6.

Veiligheid

Dit product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en niet voor menselijk of therapeutisch gebruik. Mogelijk schadelijk. Vermijd langdurige of herhaalde blootstelling. Vermijd aanraking met de ogen, huid of kleding. Grondig wassen na het hanteren. Bij contact met ogen of huid, de getroffen gebieden 15 minuten met veel water spoelen en een arts raadplegen. In geval van inademen of inslikken, de persoon in de frisse lucht brengen en onmiddellijk een arts raadplegen.

Lijst van producten