Superresolutiemicroscopie Kleurstoffen
CF® kleurstoffen voor multicolor superresolutiemicroscopie
Recente publicaties waarin synthetische kleurstoffen voor superresolutiebeeldvorming worden vergeleken, hebben aangetoond dat CF®-kleurstoffen de beste prestaties leveren voor meerdere methoden. De superieure helderheid, fotostabiliteit en fotochemische schakeleigenschappen van bepaalde CF®-kleurstoffen zijn ideaal voor 3-D SIM, 3-D STORM en andere superresolutietechnieken.
Biotium's CF®405M is de helderste en meest fotostabiele fluorescerende kleurstof met korte golflengte voor SIM. Verschillende CF®-kleurstoffen in het zichtbare rood, verrood en nabij-infrarood zijn gevalideerd voor STORM, waaronder beeldvorming in drie kleuren met CF®568, CF®647 en CF®680. Zie Lehmann et al. 2015 en een volledige lijst met referenties op de volgende pagina. Biotium biedt een brede selectie CF® kleurstofgelabelde antilichamen, waaronder single-label secondaries met een lage labelinggraad, die naar verluidt optimaal is voor STORM1. We bieden ook andere conjugaten, reactieve kleurstoffen en labelingkits.
Biotium's CF®405M is de helderste en meest fotostabiele fluorescerende kleurstof met korte golflengte voor SIM. Verschillende CF®-kleurstoffen in het zichtbare rood, verrood en nabij-infrarood zijn gevalideerd voor STORM, waaronder beeldvorming in drie kleuren met CF®568, CF®647 en CF®680. Zie Lehmann et al. 2015 en een volledige lijst met referenties op de volgende pagina. Biotium biedt een brede selectie CF® kleurstofgelabelde antilichamen, waaronder single-label secondaries met een lage labelinggraad, die naar verluidt optimaal is voor STORM1. We bieden ook andere conjugaten, reactieve kleurstoffen en labelingkits.
Figuur 1. CF®568 (links) produceert betere beelden dan Cy®3b (rechts) in 3-D STORM microscopie.
Gefixeerde cellen werden gekleurd met antilichaam tegen muis-tubuline gevolgd door met kleurstof geconjugeerde antimuis secundaire antilichamen. Zie figuur 2 legenda voor beeldvormende omstandigheden. Kleurstof moleculen werden fotoswitched en afgebeeld met behulp van een 560 nm laser, een 405 nm laser werd gebruikt om kleurstof reactivering helpen om de emitterende staat
Gefixeerde cellen werden gekleurd met antilichaam tegen muis-tubuline gevolgd door met kleurstof geconjugeerde antimuis secundaire antilichamen. Zie figuur 2 legenda voor beeldvormende omstandigheden. Kleurstof moleculen werden fotoswitched en afgebeeld met behulp van een 560 nm laser, een 405 nm laser werd gebruikt om kleurstof reactivering helpen om de emitterende staat
Figuur 2. Vergelijking van conventionele breedveldmicroscopie (links) met STORM (rechts) waarbij CF® kleurstofconjugaten worden gebruikt.
Gefixeerde cellen werden gekleurd met antilichaam tegen muis-tubuline gevolgd door met CF® kleurstof geconjugeerd secundair antilichaam tegen muis (bovenste rij: CF®647, middelste rij: CF®660C, onderste rij: CF®680). Voor STORM werden de monsters afgesloten in buffer met 5% (w/v) glucose, 100 mM cysteamine, 0,8 mg/mL glucoseoxidase en 40 μg/mL katalase in Tris-HCl (pH 7,5). Monsters werden afgebeeld op een Nikon Ti-Eclipse w / PFS microscoop met een CFI Plan Apo Lambda 100x olie objectief. Kleurstof moleculen werden fotoswitched en afgebeeld met behulp van een 647 nm laser, een 405 nm laser werd gebruikt om kleurstof reactivering helpen om de emitterende staat. De emissie werd verzameld met een Andor iXon Ultra 897 EMCCD-camera voor een totaal van 100.000 beelden per beeld bij een beeldsnelheid van 110 Hz.
Gefixeerde cellen werden gekleurd met antilichaam tegen muis-tubuline gevolgd door met CF® kleurstof geconjugeerd secundair antilichaam tegen muis (bovenste rij: CF®647, middelste rij: CF®660C, onderste rij: CF®680). Voor STORM werden de monsters afgesloten in buffer met 5% (w/v) glucose, 100 mM cysteamine, 0,8 mg/mL glucoseoxidase en 40 μg/mL katalase in Tris-HCl (pH 7,5). Monsters werden afgebeeld op een Nikon Ti-Eclipse w / PFS microscoop met een CFI Plan Apo Lambda 100x olie objectief. Kleurstof moleculen werden fotoswitched en afgebeeld met behulp van een 647 nm laser, een 405 nm laser werd gebruikt om kleurstof reactivering helpen om de emitterende staat. De emissie werd verzameld met een Andor iXon Ultra 897 EMCCD-camera voor een totaal van 100.000 beelden per beeld bij een beeldsnelheid van 110 Hz.
CF®-kleurstoffen en aanverwante producten :