NeoProof DNA polymerase
|
Omschrijving
|
|
Productonderdelen en opslag
- Geleverd met 10× reactiebuffer en 5× stabilisatoroplossing
- Aanbevolen opslag bij -20 °C in een vriezer met constante temperatuur
- Stabiel tot de vervaldatum indien bewaard zoals gespecificeerd
- Eenheidsdefinitie: opname van 10 nmol dNTPs in 30 minuten bij 72 °C
PCR-protocol
- Standaardprotocol als algemene richtlijn voor PCR amplificatie
- Richtlijnen voor het opstellen van reacties, inclusief volgorde van componenten en assemblage op ijs
- Cyclische parameters voor denaturatie, annealing en extensie
- Gelelektroforese voor het analyseren van PCR-producten
Overwegingen voor PCR-ontwerp
- Ontwerpen van PCR-primers met de juiste lengte (15-30 basen)
- Aanbevelingen voor primer-sequenties om de PCR-opbrengst te verbeteren en degradatie te vermijden
- Richtlijnen voor primer GC-gehalte en het vermijden van interne secundaire structuur
- Aanbevelingen om primer-dimervorming en niet-specifieke primer-annnealing te voorkomen
- Belang van vergelijkbare smelttemperaturen (Tm) voor beide primers
DNA-sjabloon
- Aanbevolen hoeveelheden uitgangsmateriaal gebaseerd op kwaliteit en complexiteit
- Richtlijnen voor het gebruik van genomisch DNA-sjablonen en cDNA-synthesereactiesjablonen
- Voorzichtig met het overschrijden van 10% van het uiteindelijke PCR-reactievolume voor cDNA-sjablonen
Enzymconcentratie
- Aanbevolen enzymconcentratie van 1,25 U (0,5 μL) in een reactie van 50 μL
- Hogere enzymvolumes (tot 2,5 U) voor amplificatie van overvloedige sjablonen (>50 ng gDNA)
- Verdunningsopties voor gemak tijdens PCR-assemblage
Assays voor kwaliteitscontrole
- Zuiverheidsevaluatie door middel van SDS-PAGE en Coomassieblauwkleuring
- Evaluatie van besmetting met genomisch DNA via PCR
- Nuclease-tests om te controleren op het inkepen of afsnijden van nucleïnezuren
- Functionele test met DNA-fragmenten van verschillende grootte van menselijk genomisch DNA