NeoTaqII DNA polymerase

Omschrijving

De nieuwe generatie Taq-afgeleide DNA-polymerases NB-60-0005 geoptimaliseerd voor standaard PCR-toepassingen.
Ontwikkeld om hoge DNA-opbrengsten te produceren bij kortere PCR-cyclustijden (15-30 s/kb extensie).
Ontdoet van 3´→5´ exonuclease activiteit en ondersteunt betrouwbare amplificatie van een breed scala aan DNA templates tot 6 kb.
Geschikt voor PCR onder minimale optimalisatiecondities.

Opslagomstandigheden

Alle componenten moeten worden bewaard bij -20°C in een vriezer zonder ontdooicycli om een maximale houdbaarheid te garanderen.
Het enzym blijft tot 3 dagen stabiel bij 4 °C of kamertemperatuur zonder de stabiliteit aan te tasten.
Het product blijft stabiel tot de vervaldatum als het wordt bewaard zoals aangegeven.

Eenheid Definitie

Eén eenheid van het enzym wordt gedefinieerd als de hoeveelheid die nodig is om de opname van 10 nmol dNTPs in zuur onoplosbaar materiaal te katalyseren in 30 minuten bij 72 °C onder gecontroleerde testomstandigheden.

Enzymconcentratie

Magnesiumchloride-oplossing

Een meegeleverde 50 mM MgCl2-oplossing stelt gebruikers in staat om de Mg2+-concentratie in PCR-opstellingen te optimaliseren.
Een concentratie van 2,5 mM MgCl2 is over het algemeen effectief met Neo Biotech Taq II DNA polymerase.
Vortex de MgCl2-oplossing grondig na het ontdooien

Primerontwerp

PCR-primers moeten 15-30 basen lang zijn en het interessegebied flankeren.
Primers moeten 40-60% GC-gehalte bevatten en sequenties vermijden die interne secundaire structuur kunnen produceren.
De 3'-uiteinden van de primers moeten niet complementair zijn om primer-dimeervorming te voorkomen.
Vermijd drie opeenvolgende G- of C-nucleotiden in de buurt van het 3'-uiteinde om niet-specifieke primeraanhechting te voorkomen.
Idealiter hebben beide primers bijna identieke smelttemperaturen (Tm) voor efficiënte annealing.

DNA-sjabloon

De aanbevolen hoeveelheid genomisch DNA-sjabloon is 10 ng tot 500 ng, maar er kan al 5 pg worden gebruikt.
Lagere hoeveelheden kunnen voldoende zijn voor amplificatie van minder complex DNA (1-20 ng).
Als cDNA-synthese als sjabloon wordt gebruikt, mag niet meer dan 10% van het uiteindelijke PCR-reactievolume worden gebruikt.

Assays voor kwaliteitscontrole

Taq II DNA polymerase wordt getest op zuiverheid, waarbij >90% zuiverheid wordt bepaald door SDS polyacrylamide gelelectroforese en Coomassie Blauw kleuring.
Verontreiniging met genomisch DNA wordt geëvalueerd via PCR en mag niet detecteerbaar zijn.

Nuclease testen

Nuclease-tests worden uitgevoerd met pNZY28 plasmide DNA en Neo Biotech Taq II DNA polymerase, gevolgd door visualisatie op een GreenSafe Premium-gekleurde agarosegel.
Er mag geen zichtbaar knippen of snijden van het nucleïnezuur worden waargenomen. Vergelijkbare tests worden uitgevoerd met de reactiebuffer en MgCl2-oplossing.

Functionele test

Taq II DNA-polymerase is uitgebreid getest op zijn prestaties bij PCR-amplificatie van DNA-fragmenten van verschillende grootte uit menselijk genomisch DNA.
De resulterende PCR-producten moeten verschijnen als enkele banden op een gekleurde agarose.