Reagentia en instrumenten voor immunologie, celbiologie en moleculaire biologie.
 
> > > > Protocol openbaring versterkt : DBS Bereik

Protocol openbaring versterkt : DBS Bereik

Protocol openbaring versterkt : DBS Bereik

 

 

 

 

 

 

 

 

 


I. Vereist materiaal

Reagentia
- Primair antilichaam
- Primair antilichaam Verdunner
- Pre-blocking oplossing
- Montage medium

Buffers
- Immuno wasbuffer
- Xyleen of wasmiddelen
- Absolute ethanol
- Gedestilleerd of gedeïoniseerd water



II. Experimenteerlengte
- 10 mn van het blokkeren
- 30-60 mn incubatie van secties in primair antilichaam
- 36 of 31 mn van anderen incubatie
- 20 mn spoelstappen
- TOTAAL : 1h31 tot 2h06


III. Vlekkenprocedure

1. Peroxidase Blok. Incubeer de objectglaasjes 5 minuten in het Peroxidase Block.
Spoel de objectglaasjes 3 x 1 minuut met Immuno Wash Buffer.
2. Pre-blocking (optioneel). Voeg 2 druppels (100 µL) of voldoende volume Pre-Blocking Solution toe om de weefselsectie te bedekken (10 minuten).
Oplossing laten uitlekken of afdeppen. Niet afspoelen.
3. Primair antilichaam. 30 - 60 minuten incuberen met primair antilichaam, bereid volgens het door de fabrikant aanbevolen protocol in de gewenste concentratie. Geconcentreerde primaire antilichamen kunnen worden verdund met primair antilichaamverdunner.
Was de glaasjes 3 x 1 minuut in Immuno Wash Buffer.
4. Polymeer Penetratieverbeteraar. Breng de Polymer Penetration Enhancer aan en incubeer 10 minuten.
Spoel de objectglaasjes 3 x 1 minuut met Immuno Wash Buffer.
5. PolyVue Label. Incubeer het weefsel met PolyVue HRP Label reagens gedurende 10 minuten.
Was de glaasjes 3 x 1 minuut met Immuno Wash Buffer.
6. Stabiele DAB/Plus. Bereid de werkoplossing voor stabiel DAB/Plus-substraat (zie hierboven).
Incubeer weefsel gedurende 5-10 minuten met bereide Stabiele DAB/Plus-substraatoplossing. Controleer de mate van kleuring om de optimale incubatietijd te bepalen.
Spoel de objectglaasjes 3 x 1 minuut met water.
7.  Tegenstemmen. Incubeer het weefsel gedurende 1 minuut met tegenkleuring (bv. hematoxyline).
Was de objectglaasjes 3 x 1 minuut in water, gevolgd door 1 x 1 minuut in Immuno Wash Buffer, daarna 1 x 1 minuut in water.
8. Dehydrateren&Coverslippen. Dehydrateer de weefsels door middel van een ethanolreeks, gevolgd door een xyleenreeks. Breng dekglaasjes aan met permanent inbedmiddel.


IV.Zoekmachine
- Primair antilichaam