Compensação, contagem e calibração de citometria de fluxo

Compensação, contagem e calibração são componentes críticos da citometria de fluxo que garantem resultados precisos e confiáveis.

A compensação corrige a sobreposição espectral quando se utilizam múltiplos corantes fluorescentes, o que pode gerar sinais falso-positivos, pois um detector pode captar emissões de múltiplos fluoróforos. Esse processo envolve o uso de controles com coloração única para medir o derramamento espectral e aplicar os valores de compensação calculados aos dados experimentais.

A contagem precisa de células é essencial para quantificar populações específicas dentro de uma amostra, pois a citometria de fluxo permite a enumeração de células individuais que passam por um feixe de laser, com o número total de eventos registrado ajustado com base no volume da amostra analisada.

A calibração também é importante; envolve a verificação do desempenho do instrumento utilizando esferas padronizadas ou controles com propriedades conhecidas para manter a precisão e a reprodutibilidade. Verificações regulares de calibração garantem que configurações como as tensões do tubo fotomultiplicador (PMT) estejam otimizadas para a detecção de sinais, minimizando o ruído de fundo.

Juntas, compensação eficaz, contagem precisa e calibração adequada aumentam a confiabilidade da interpretação dos dados na citometria de fluxo, tornando-a uma ferramenta poderosa para analisar características celulares em várias aplicações de pesquisa.