Preparação de biblioteca é uma etapa crítica que envolve a conversão de ácidos nucleicos em um formato adequado para sequenciamento. Esse processo é essencial para obter dados de sequenciamento de alta qualidade e pode impactar significativamente a precisão e a confiabilidade das análises subsequentes.
A preparação de bibliotecas geralmente envolve várias etapas-chave: fragmentação de ácidos nucleicos, reparo das extremidades, ligação de adaptadores e amplificação (Figura 1). Essas etapas permitem a geração de uma biblioteca que pode ser sequenciada usando várias plataformas de NGS. A escolha do método de preparação da biblioteca pode variar dependendo do tipo de ácido nucleico que está sendo analisado (DNA ou RNA), a quantidade e qualidade do material de partida, e os requisitos específicos do projeto de sequenciamento.
Figura 1: Preparação de biblioteca de DNA.
Avanços Recentes
Estudos recentes destacaram estratégias inovadoras para melhorar a eficiência e a qualidade da preparação da biblioteca:
- Sequenciamento Direcionado: Um novo método envolvendo a circularização do DNA genômico permite o sequenciamento direcionado com menos etapas e requisitos reduzidos de amplificação por PCR. Essa abordagem simplifica a preparação da biblioteca ao integrar oligonucleotídeos de captura diretamente no DNA circularizado, facilitando o direcionamento eficiente sem a necessidade de amplificação extensa.
- Bibliotecas de Alta Diversidade: Avanços na codificação por código de barras de vetores virais permitiram a geração de bibliotecas plasmídicas de alta diversidade, que podem avaliar a função genética in vivo. Esse método permite a produção de milhões de plasmídeos com código de barras únicos em uma única reação, aumentando significativamente a taxa de produção e a versatilidade de aplicações em genômica funcional.
- Melhorias no Controle de Qualidade: Medidas aprimoradas de controle de qualidade durante a preparação da biblioteca foram desenvolvidas para garantir alta fidelidade nos resultados do sequenciamento. Por exemplo, o uso de sistemas Bioanalyzer permite que os pesquisadores avaliem com precisão a qualidade da biblioteca antes do sequenciamento, garantindo que apenas bibliotecas de alta qualidade sejam processadas.
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