Serviço personalizado: Produção de bibliotecas de anticorpos monoclonais

 

São visados tanto os péptidos lineares como os epítopos estruturais na superfície da proteína.

Uma biblioteca SEAL™ típica

• consiste em 6-12 anticorpos monoclonais de elevada afinidade
• visa especificamente 4-8 epítopos independentes da superfície da proteína.
• Isto aumenta consideravelmente a possibilidade de descobrir anticorpos bem sucedidos em comparação com os métodos tradicionais em que os anticorpos apenas visam 1-3 epítopos contra péptidos curtos ou antigénios de proteínas solúveis.

Com base nos resultados da aplicação de mais de 100 bibliotecas SEAL™ geradas para proteínas de membrana, factores solúveis, factores de transcrição e cinases, em média, são descobertos pelo menos 2 vezes mais anticorpos bem sucedidos para experiências Western e IP a partir de anticorpos SEAL™ do que a partir de anticorpos gerados por métodos convencionais. Para alvos difíceis, como receptores de membrana e factores de transcrição, os anticorpos SEAL™ têm 3-4 vezes mais probabilidades de serem bem sucedidos. Isto não é surpreendente, uma vez que o número de anticorpos independentes e epítopos visados é várias vezes superior nos anticorpos SEAL? e para proteínas de baixa abundância, este parece ser um fator ainda mais crítico para a geração de anticorpos bem sucedidos. A geração de bibliotecas de anticorpos SEAL? tem vantagens significativas em relação à geração tradicional de anticorpos monoclonais e policlonais em termos de tempo, custo e, mais importante, qualidade dos anticorpos..

Geração da biblioteca SEAL™

É utilizado um modelo computacional patenteado para identificar trechos de dez resíduos que estão expostos na superfície da proteína (antigénios SEAL™). Ao combinar a previsão da estrutura secundária, a análise filogenética e a modelação estrutural, este método atinge uma precisão de 73% (67% de sensibilidade e 82% de especificidade) na identificação de epítopos peptídicos lineares expostos (epítopos SEAL™).



Os genes sintéticos que codificam múltiplos epítopos SEAL? são inseridos num vetor de ADN patenteado que consiste em Factores de Melhoria da Imunogenicidade (IEF, por exemplo, múltiplos epítopos T) e sequências de ADN que resultarão em proteínas recombinantes particuladas e altamente imunogénicas que amostram a superfície da proteína alvo quando expressas em E.Coli.



Os domínios estruturais são produzidos como proteínas solúveis em E.Coli ou em células de mamíferos em paralelo com os epítopos lineares SEAL™. É utilizado um sistema patenteado de expressão/secreção bacteriana para produzir proteínas solúveis no meio de cultura.
Os ratinhos imunizados com imunogénios estruturais produzirão anticorpos que podem reconhecer alguns epítopos conformacionais dominantes das proteínas alvo. Este tipo de anticorpo é frequentemente mais bem sucedido para aplicações como IP, citometria de fluxo ou estudos funcionais..



Os ratinhos imunizados com antigénios epítopos IEF-SEAL™ utilizando uma imunização patenteada e optimizada com apenas uma pequena quantidade de antigénios produzem respostas imunitárias IgG de elevada afinidade no espaço de três semanas. As células do baço dos ratinhos sacrificados são fundidas com células SP2/0 e analisadas com ELISA competitivo quantitativo para selecionar linhas de células de hibridoma que segregam anticorpos que reconhecem especificamente sequências de epítopos com pelo menos uma afinidade nanomolar. Os hibridomas seleccionados são então submetidos a várias rondas de subclonagem para estabelecer linhas celulares estáveis.

Os produtos da biblioteca de anticorpos monoclonais SEAL™ foram concebidos para maximizar a taxa de sucesso no desenvolvimento de anticorpos funcionais para diversas aplicações e, para o efeito, são oferecidos 4 tipos padrão de bibliotecas SEAL. Estes produtos diferem em:

• o número e o tipo (péptidos ou proteínas) de antigénios utilizados para a imunização
• o número de epítopos visados
• o número de anticorpos entregues aos clientes

A comparação de produtos e algumas regras de seleção úteis são indicadas abaixo: